化痰祛濕活血方干預(yù)非酒精性脂肪性肝炎大鼠ADPN-AMPK-ACC通路的研究.pdf

1、　　目的：本課題在前期實驗研究基礎(chǔ)上,以高脂飼料聯(lián)合四環(huán)素腹腔注射制備大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,探討化痰祛濕活血方對模型鼠ADPN/AMPK/ACC信號通路基因及蛋白的影響,揭示 NASH 發(fā)生發(fā)展中 ADPN/AMPK/ACC 信號通路作用機(jī)制,闡釋化痰祛濕活血方防治NASH的作用機(jī)理,從基因和蛋白水平為NASH的中醫(yī)藥防治提供理論依據(jù)。
　　方法：以多烯磷脂酰膽堿(易善復(fù))膠囊為陽性對照,將 72 只 SPF 級 SD雄

2、性大鼠,隨機(jī)分為空白組、模型組、對照組和化痰祛濕活血方高(高劑量組)、中(中劑量組)、低(低劑量組)劑量組,每組 12 只。喂養(yǎng)于 IVC 動物實驗室內(nèi)?？瞻捉M予基礎(chǔ)飼料,其余 5組均飼以高脂飼料(84%基礎(chǔ)飼料+10%豬油+5%蛋黃粉+1%膽固醇)聯(lián)合四環(huán)素(首次劑量 10mg/100g·鼠重,二次至末次劑量7mg/100g·鼠重。)腹腔注射造模。造模的第 2 周起,除空白組外,各組均按1ml/100g·d-1分別給予生理鹽水及相應(yīng)藥

3、物灌胃治療處理。多烯磷脂酰膽堿膠囊劑量為0.0285g/100g·d-1。高、中、低劑量組分別將化痰祛濕活血方按5.04g/100g·d-1、2.52/100g·d-1、1.26/100g·d-1給藥。根據(jù)每周鼠重變化調(diào)整藥物劑量,第 7周結(jié)束后取材,觀察血清 ALT、AST、TG、TC、GLU 水平；取肝組織觀察肝濕重、肝指數(shù)、病理組織學(xué)變化、測定肝勻漿 FFA含量,免疫組化定位 ADPN、AdipoR2蛋白表達(dá)分布；實時熒光定量PC

4、R及ELISA測肝組織ADPN、AdipoR2、AMPK、ACC、CPT-1的基因蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.與空白組比較,模型組肝濕重、肝指數(shù)、血清 ALT、AST、TC、TG、GLU水平、肝勻漿FFA含量均有顯著升高(P<0.01)；ADPN/AMPK/ACC信號通路中肝組織ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.01), ACC基因及蛋白顯著升高(P<0.01)；病理

5、變化呈中重度脂肪變。
　　2.與模型組比較,各用藥組能有效降低肝指數(shù),血清 ALT、AST、TG、TC、GLU、肝勻漿FFA,其中以高劑量組療效顯著優(yōu)于其他各用藥組(P<0.01)。在ADPN/AMPK/ACC信號通路中,高劑量組能有效上調(diào)ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表達(dá),下調(diào)ACC基因及蛋白,療效優(yōu)于其它各用藥組( P<0.01)。
　　3.與對照組相比,高劑量組療效明顯優(yōu)于對照組；中劑

6、量組降低肝指數(shù),血清ALT、AST、TG、TC、GLU、肝勻漿FFA療效與對照組基本相當(dāng)(P>0.05),大致優(yōu)于低劑量組。在ADPN/AMPK/ACC信號通路中,上調(diào)ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表達(dá),下調(diào)ACC基因及蛋白,中劑量組與對照組在調(diào)控通路中的基因蛋白表達(dá)效果相當(dāng)(P>0.05),且優(yōu)于低劑量組。
　　4. ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1卻與鼠重、肝濕重、肝指數(shù)、ALT、A

7、ST、TG、TC、GLU、FFA、ACC 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)?；奠顫窕钛娇箵?NASH 的作用與其劑量呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.本研究采用高脂餐飲食加四環(huán)素腹腔注射成功制備大鼠NASH模型。
　　2.NASH 形成和發(fā)展過程中,隨著 ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1 在組織間蛋白含量的減少,鼠重、肝濕重、肝指數(shù)、ALT、AST、TG、TC、GLU、FFA、ACC呈現(xiàn)升高的態(tài)勢。
　

8、　3.化痰祛濕活血方能有效激活 ADPN/AMPK/ACC 通路基因及蛋白表達(dá),使膽固醇及脂肪酸的合成原料下降,增加脂肪酸的β氧化,減少肝細(xì)胞脂肪沉積,減輕肝臟炎癥。
　　4.從療效學(xué)指標(biāo)與 ADPN/AMPK/ACC 通路基因和蛋白表達(dá)來看,化痰祛濕活血方高劑量的療效優(yōu)于多烯磷脂酰膽堿(易善復(fù))膠囊膠囊。
　　5.隨著劑量的增加,化痰祛濕活血方與療效存在量效關(guān)系,療效次序即高劑量組>中劑量組>低劑量組,這為我們臨床