VEGFR-1活化誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)表型轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文VEGFR1活化誘導(dǎo)上皮間質(zhì)表型轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究姓名：艾軍華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：董家鴻20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文缺失，43例(43／82，5244％)呈正常陽性表達(dá)；Ncadherin有37例(37／82，4512％)表達(dá)陽性，Vimentin有44例(44／82，53。66％)表達(dá)陽性。統(tǒng)計分析顯示，上皮標(biāo)志物Ecadherin、0【一catenin在肝癌

2、細(xì)胞膜上的表達(dá)下降或缺失，以及Ncadherin、Vimentin等間葉標(biāo)志物在肝癌細(xì)胞漿中的陽性表達(dá)均與腫瘤分期、分化、腫瘤包膜和靜脈侵襲等臨床病理學(xué)因素顯著相關(guān)(P005)；統(tǒng)計分析還表明，VEGFR1表達(dá)與肝細(xì)胞癌的腫瘤分期、分化、靜脈侵襲和腫瘤包膜完整等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的病理學(xué)因素顯著相關(guān)(氏005)，并且與E—cadherin表達(dá)缺失和Vimentin、Ncadherin陽性表達(dá)相關(guān)(P005)；這就提示，在肝細(xì)胞癌中VEGFR1

3、促肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用可能與誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生上皮一間葉表型轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)。2在檢測的四株人肝癌細(xì)胞MHCC97一H、MHCC97一L、SMMC7721、HepG2和正常人肝細(xì)胞株L一02中，具有轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株有VEGFR1mRNA和蛋白表達(dá)，而且VEGFR1的表達(dá)水平與肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān)，即高轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞其VEGFR一1的表達(dá)也高。在檢測的四株肝癌細(xì)胞中MHCC97H有100％發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的潛能，其VEGFR1m

4、RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平也最高，因此完全可以用MHCC97一H作為下一步體外研究的靶細(xì)胞，以明確VEGFR1活化能否誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生上皮一間葉表型轉(zhuǎn)化(EMT)。3VEGFB處理MHCC97H細(xì)胞48h后，細(xì)胞極性喪失，呈梭形、紡錘樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞一細(xì)胞間隙增寬說明細(xì)胞間粘附喪失，并且從細(xì)胞膜伸出偽足。而對照組細(xì)胞維持母細(xì)胞的上皮樣表型；給予VEGFR1的中和抗體18F1預(yù)處理后，VEGF—B刺激并不能改變MHCC97一H細(xì)胞形態(tài)，仍維持

5、母細(xì)胞的上皮樣表型，這初步提示VEGFR1活化可能誘導(dǎo)了肝癌細(xì)胞發(fā)生上皮間葉表型轉(zhuǎn)化(EMT)。通過RT—PCR、Westernblotting和細(xì)胞熒光免疫組化等方法進(jìn)一步檢測了VEGFR1活化后肝癌細(xì)胞表型標(biāo)志物表達(dá)的改變，發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞中上皮標(biāo)志物Ecadherin和acatenin的表達(dá)水平顯著低于對照組，而且Ecadherin和0【catenin的表達(dá)部位也發(fā)生了改變，即在胞膜表達(dá)減少，胞漿中的表達(dá)增加；間質(zhì)標(biāo)志物Ncadhe

6、rin、Vimentin在實驗組細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于對照組，Ncadherin、Vimentin在胞漿中的表達(dá)明顯增加；細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲試驗結(jié)果顯示，VEGF—B處理MHCC97一H細(xì)胞后，細(xì)胞遷移和侵襲能力顯著高于對照組，說明VEGFR一1活化誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT后，增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。實驗組給予VEGFR1的中和抗體18F1預(yù)處理后能夠阻斷上述效應(yīng)的發(fā)生。這進(jìn)一步提示，VEGFR1活化能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT。4干預(yù)