5-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法對(duì)白念珠菌抗菌效應(yīng)研究.pdf

1、研究背景:
　　白念珠菌作為一種常見的條件致病菌，易引起皮膚黏膜甚至深部器官的感染。目前為止，口服及外用藥物仍是對(duì)抗白念珠菌病感染主要方法。近年來(lái)隨著糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑在臨床的大量使用，其耐藥性也日益增強(qiáng)，抗白念珠菌藥物治療面臨的挑戰(zhàn)也越來(lái)越大。近年來(lái)PDT在抗白念珠菌感染的臨床治療上，部分療效得到了證實(shí)[1]。
　　PDT是一種微創(chuàng)醫(yī)學(xué)治療方法[2]，利用光敏劑轉(zhuǎn)化生成的原卟啉Ⅸ(PpⅨ)經(jīng)光照產(chǎn)生具有殺傷作用的單線態(tài)

2、氧而發(fā)揮治療效果。在實(shí)際應(yīng)用中，選擇什么樣的光敏劑類型、光敏劑濃度的高低、光敏劑孵育時(shí)間及照光時(shí)間的長(zhǎng)短、光照劑量的強(qiáng)弱都處于不斷探索中。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)也不完全相同。這也影響了臨床上PDT在皮膚科抗白念珠菌感染上的發(fā)展。本研究首先探索了PDT療法對(duì)白念珠菌的抗菌效應(yīng)及量效關(guān)系，進(jìn)一步為臨床選擇最佳光敏劑濃度以及最佳孵育時(shí)間提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:
　　1、對(duì)兩種測(cè)定原卟啉Ⅸ(PpⅨ)熒光強(qiáng)度的方法進(jìn)行比較，探求高效、準(zhǔn)確

3、、可靠、快速的檢測(cè)方法。
　　2、探求PpⅨ熒光強(qiáng)度與孵育時(shí)間和ALA濃度的關(guān)系。
　　3、研究PDT療法對(duì)白念珠菌的抗菌效應(yīng)。
　　方法:
　　1、將白念珠菌懸液與5-氨基酮戊酸(5-ALA)避光孵育。分別利用熒光分光光度計(jì)和共聚焦顯微鏡測(cè)量PpⅨ熒光強(qiáng)度。
　　2、制備白念珠菌懸液，分設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)分兩部分，一是將不同濃度5-ALA與白念珠菌菌懸液混合避光60min孵育;二是將白念珠菌懸液與濃度

4、為200mg/ml的5-ALA混合后35℃避光分別孵育15、30、45、60、90、120、150、180min。利用共聚焦激光掃描顯微鏡測(cè)量PpⅨ熒光強(qiáng)度;利用MTT法測(cè)定5-ALA-PDT對(duì)白念珠菌生長(zhǎng)的抑制率;通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)板測(cè)定殘余菌落數(shù)。
　　結(jié)果:
　　1、兩種測(cè)量方法的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。共聚焦顯微鏡操作簡(jiǎn)單，方便快捷，自帶分析軟件可以直接算出測(cè)值，計(jì)算精確，但是測(cè)量?jī)r(jià)格較貴，熒光分光光度計(jì)

5、操作相對(duì)繁瑣，但是價(jià)格便宜。
　　2、實(shí)驗(yàn)組白念珠菌與不同濃度ALA避光孵育后均有有熒光物質(zhì)PpⅨ產(chǎn)生，200mg/ml以上各濃度產(chǎn)生的PpⅨ之間進(jìn)行比較，p＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。300mg/ml以下各濃度組產(chǎn)生的PpⅨ熒光強(qiáng)度與濃度有相關(guān)性。對(duì)照組沒(méi)有檢測(cè)到PpⅨ。
　　3、白念珠菌與ALA避光孵育不同時(shí)間后，實(shí)驗(yàn)組有熒光物質(zhì)PpⅨ產(chǎn)生，孵育30min到90min產(chǎn)生的PpⅨ最多，120min以后PpⅨ開始明顯減少，對(duì)