羥氯喹對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞及DNA甲基化的影響.pdf

1、目的：研究羥氯喹(hydroxy chloro quine,HCQ)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupuseryth ematosus,SLE)患者外周血漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(plasmacytoi ddendritic cells,pDC)及DNA甲基化水平的影響,初步探究HCQ在SLE治療中的作用機(jī)制。
　　方法：收集2011年3月至2012年3月我院門(mén)診或住院SLE患者45例,診斷均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR

2、)修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)治療情況將SLE患者分為三組:1)新發(fā)未治療組(15例);2)單用小劑量強(qiáng)的松(≤10mg/d)組(15例);3)小劑量強(qiáng)的松(≤10mg/d)+HCQ(400mg/d)組(15例)。依據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)對(duì)其疾病活動(dòng)進(jìn)行評(píng)分,20例患者SLEDAI積分>5分為活動(dòng)期,25例患者SLEDAI積分≤5分為穩(wěn)定期。另收集健康對(duì)照15名,SLE患者和健康對(duì)照在性別和年齡上相匹配。
　　

3、清晨空腹采集EDTA抗凝靜脈血15ml,密度梯度離心法分離SLE患者和正常對(duì)照外周血單核細(xì)胞(PBMC),同時(shí)留取血清。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血pDC水平及其表面CD32、CD40、CD86、BDCA2、BDCA4、CD62L、CXCR4分子的表達(dá);抽提PBMC基因組DNA,采用整體甲基化定量試劑盒檢測(cè)基因組DNA甲基化水平;提取總RNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3BmRNA的表達(dá)量

4、;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IFN-α、IL-6、TNF-α的濃度。
　　結(jié)果：SLE患者外周血pDC水平顯著低于正常對(duì)照組(P<0.001),其中活動(dòng)組患者pDC水平顯著低于穩(wěn)定組(P<0.05),SLE患者中有關(guān)節(jié)炎、蛋白尿或白細(xì)胞減低者外周血pDC水平顯著低于無(wú)上述臨床表現(xiàn)者(P<0.01、P<0.05、P<0.05),且pDC水平與蛋白尿呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.359,P<0.05)。
　　未治療組SLE

5、患者外周血pDC水平顯著低于正常對(duì)照組(P<0.001),單用強(qiáng)的松組pDC水平與未治療組患者相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,強(qiáng)的松+HCQ組pDC水平顯著高于未治療組和單用強(qiáng)的松組患者(P<0.01、P<0.01);未治療組SLE患者外周血pDC表面CD32、CD86、CXCR4、BDCA4分子表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著升高(P<0.01、P<0.05、P<0.05、P<0.05),強(qiáng)的松+HCQ組pDC表面CD32、CXCR4表達(dá)水平較未治療

6、組及單用強(qiáng)的松組均顯著降低(P<0.01、P<0.05;P<0.05、P<0.001)。
　　SLE患者PBMC基因組DNA甲基化水平顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01),但活動(dòng)組與穩(wěn)定組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。未治療組與單用強(qiáng)的松組及正常對(duì)照組DNA甲基化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;強(qiáng)的松+HCQ組DNA甲基化水平較未治療組和單用強(qiáng)的松組顯著降低(P<0.01、P<0.05)。SLE患者PBMC中DNMT1mRNA表達(dá)水平顯著低于正常對(duì)照

7、組(P<0.01),DNMT3BmRNA表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01),相關(guān)性分析顯示DNMT1mRNA表達(dá)與DNA甲基化呈正相關(guān)(r=0.232,P<0.05);DNMT1mRNA、DNMT3AmRNA、DNMT3BmRNA表達(dá)水平在未治療組及各治療組之間,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　SLE患者血清IFN-α、IL-6水平顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05、P<0.05),其中活動(dòng)組SLE患者血清IFN-α水平顯著高于穩(wěn)

8、定組(P<0.05);未治療組SLE患者血清IFN-α水平顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05),單用強(qiáng)的松組和強(qiáng)的松+HCQ組IFN-α水平均顯著低于未治療組(P<0.01、P<0.05),但二者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清IL-6、TNF-α水平在未治療組與各治療組之間,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：SLE患者外周血pDC水平和DNA甲基化水平顯著降低,pDC表面多種活化、趨化相關(guān)分子表達(dá)水平明顯升高,DNMT1基因表達(dá)降低,IF