系統(tǒng)性紅斑狼瘡未成熟樹突狀細(xì)胞吞噬早期凋亡細(xì)胞的研究.pdf

1、目的: 通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cells，imDC)，采用流式細(xì)胞儀檢測imDC吞噬早期凋亡細(xì)胞的水平，探討imDC與SLE發(fā)病的關(guān)系，進(jìn)一步闡明SLE的發(fā)病機(jī)制，尋找潛在的SLE的治療靶點(diǎn)，為特異性治療藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)及方向。 方法: 1、隨機(jī)抽取30例確診為SLE且未

2、使用激素及免疫抑制劑治療的患者和30例健康體檢者，抽取新鮮外周血20ml，分離獲得單核細(xì)胞，加入含重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(combinated human granulocyte macrophage-colonystimulating factor，rhGM-CSF)1000U/ml、重組人白介素4(combinated humaninterleukin 4，rhIL-4)500U/ml、10％胎牛血清(fetal calf

3、 serum，F(xiàn)CS)的RPMI1640培養(yǎng)液，37℃、5％CO2，全濕度飽和培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)7d。于第3d半量換液，補(bǔ)充含以上各種細(xì)胞因子的新鮮培養(yǎng)液至全量，培養(yǎng)至第7d收集懸浮細(xì)胞。用熒光標(biāo)記物PE-CDla、FITC-CD83標(biāo)記imDC，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面分子CDla、CD83的表達(dá)水平，并比較兩組間imDC的生成率的差異。 2、采用抗腫瘤藥物依托泊苷誘導(dǎo)人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(Jurkat cells)發(fā)生凋亡，

4、用凋亡試劑盒AnnexinV-FTTC/PI標(biāo)記凋亡細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞及藥物作用不同時(shí)間的細(xì)胞的凋亡率。 3、采用熒光標(biāo)記試劑PKH67、PKH26分別標(biāo)記imDC和早期凋亡細(xì)胞，標(biāo)記的imDC和早期凋亡細(xì)胞以1:2的比例混合，37℃、5％CO2，全濕度飽和培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)2h，避光。用流式細(xì)胞儀檢測imDC吞噬早期凋亡細(xì)胞的水平，比較SLE患者與健康者之間的差異。 結(jié)論: SLE患者外周血imDC吞噬