大腸癌結締組織生長因子表達及其與細胞增殖活性、ALP、PKC和β-catenin蛋白表達關系的研究.pdf

1、結締組織生長因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)是Bradham等在1991年用親和色譜法從人臍靜脈內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的；由349個氨基酸組成，相對分子量為38kDa。CTGF是CCN家族的成員之一，CCN家族成員包括半胱氨酸-61(Cyr61/CCN1)、CTGF(CCN2)、過表達的腎胚胎素(Nov/CCN3)、Wisp-1/elm1(CCN4)、Wisp-2/rCop1(CCN5)和Wi

2、sp-3(CCN6)。CTGF是一種富含半胱氨酸的分泌多肽。CTGF廣泛存在于人類多種組織器官中，如心、腦、肺、腎、胰腺和結締組織中。多種組織的成纖維細胞、部分血管內(nèi)皮、平滑肌細胞、某些上皮細胞和腫瘤細胞等都可表達CTGF。根據(jù)CTGF及其作用的部位不同，可以顯示出不同的生物學效應，主要表達為促進有絲分裂、細胞增殖、趨化細胞、誘導細胞粘附和細胞外基質(zhì)(ECM)合成等。CTGF參與機體許多正常和病理狀態(tài)下的功能活動，包括妊娠、發(fā)育分化、創(chuàng)

3、傷修復、組織纖維化、腫瘤生長等多種生物學行為。近年來研究發(fā)現(xiàn)CTGF的表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。CTGF表達水平與乳腺癌的骨轉(zhuǎn)移、惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)生、食道腺癌的不良預后、胰腺癌細胞的侵襲、黑色素瘤的浸潤有關。相反，CTGF過表達已被證實能夠抑制口腔鱗狀細胞癌的癌細胞生長。CTGF在不同的腫瘤中起著不同的重要作用，但其確切的機制還不清楚。特別是，CTGF在大腸癌組織中的表達及其作用機制的研究國內(nèi)外少有報道，有待于深入探討。 本研究旨

4、在通過采用免疫組織化學、免疫酶聯(lián)反應(ELISA)及流式細胞術(FCM)的實驗方法，對大腸癌組織及其區(qū)域淋巴結中CTGF蛋白表達水平、大腸癌患者根治手術前后血清中CTGF含量變化及大腸癌CTGF不同表達情況下的細胞增殖活性、ALP、PKC和β-catenin蛋白表達量進行分析研究。探討大腸癌CTGF表達與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和預后關系；預測大腸癌轉(zhuǎn)移潛能和預后的意義；以及CTGF能否成為大腸癌的診斷、轉(zhuǎn)移和預后判斷的分子生物學

5、標志物。初步探明CTGF在大腸癌中的作用機理，為以手術為主的大腸癌的綜合治療，提供客觀的分子生物學依據(jù)。 第一部分大腸癌及區(qū)域淋巴結中結締組織生長因子表達及與其臨床生物學行為關系的研究 目的：對大腸癌組織及其區(qū)域淋巴結中的CTGF蛋白表達水平進行檢測，探討CTGF表達與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移的關系及在預測大腸癌轉(zhuǎn)移潛能和預后中的意義。并揭示CTGF在大腸癌中的作用機制。 方法：應用免疫組織化學方法對30例

6、正常大腸上皮組織、119例大腸癌組織及其521枚區(qū)域淋巴結中的CTGF蛋白表達水平進行檢測。 結果： 1大腸癌組織與正常大腸上皮組織的CTGF表達 CTGF蛋白表達在正常大腸上皮細胞或腫瘤細胞的細胞漿或細胞膜上，呈散在分布。30例正常大腸上皮組織中，CTGF高表達率為93.33％。119例大腸癌標本中，CTGF高表達率為55.62％。大腸癌組織CTGF表達顯著低于正常大腸上皮組織(p＜0.01)。 2大腸

7、癌組織CTGF表達與臨床指標的關系 大腸癌組織CTGF表達與患者的發(fā)病年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小及大體形態(tài)無關(p＞0.05)。 3大腸癌組織CTGF表達與預后的關系 大腸癌組織CTGF低表達患者的5年復發(fā)率(60.38％)顯著高于CTGF高表達患者(25.76％)(p＜0.01)；其5年生存率(41.51％)顯著低于CTGF高表達患者(80.30％)(p＜0.01)。 結論： 1CTGF在大

8、腸上皮組織癌變的過程中，可能起著重要的作用 2大腸癌組織CTGF表達與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預后有關。 3大腸癌組織及其區(qū)域淋巴結中CTGF表達與大腸癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移及預后有關。大腸癌組織及其區(qū)域淋巴結中CTGF低表達預示著大腸癌惡性程度高、易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和預后不良。 4檢測CTGF在大腸癌組織及其區(qū)域淋巴結中的表達可作為判斷大腸癌轉(zhuǎn)移，監(jiān)測預后的分子生物學指標。 第二部分大腸癌患者血清結締組織生長因子含量變

9、化的研究 目的：對大腸癌患者根治手術前后血清中CTGF含量變化進行檢測，探討血清CTGF含量變化能否在大腸癌診斷、轉(zhuǎn)移、復發(fā)及預后中起到預警作用；CTGF能否成為大腸癌的診斷、轉(zhuǎn)移和預后判斷的有效血清學腫瘤分子標志物。同時進一步印證第一部分的研究結果。 方法：應用免疫酶聯(lián)反應(ELISA)的實驗方法檢測60例大腸癌患者根治手術前后血清中CTGF含量和30例健康獻血者血清CTGF含量。 結果： 1大腸癌患者

10、及健康者血清CTGF含量 60例大腸癌患者術前血清CTGF平均水平為2.12±0.50ng/ml，30例對照組健康獻血者血清CTGF平均水平為2.27±0.64ng/ml。大腸癌患者與健康獻血者相比，血清CTGF水平未見顯著性差異(p＞0.05)。 2大腸癌患者外科根治術前后血清CTGF含量變化 60例大腸癌患者外科根治術前血清CTGF平均水平為2.12±0.50ng/ml，外科根治術后血清CTGF平均水平為2.

11、26±0.47ng/ml。大腸癌患者手術前后血清CTGF水平未見顯著性差異(p＞0.05)。 3大腸癌分化程度與患者血清CTGF含量變化 11例高分化腺癌患者血清CTGF平均水平為2.24±0.69ng/ml，15例中分化腺癌患者血清CTGF平均水平為2.11±0.35ng/ml，34例低分化腺癌患者血清CTGF平均水平為1.97±0.76ng/ml。大腸癌患者血清CTGF水平在高、中、低分化三組間未見顯著性差異(p＞0

12、.05)。 4大腸癌浸潤深度與患者血清CTGF含量變化 3例大腸癌侵及粘膜下層(T1)、10例侵及肌層(T2)、43例侵及漿膜層(T3)和4例侵及周圍臟器(T4)患者的血清CTGF平均水平分別為2.23±0.57ng/ml、2.19±0.75ng/ml、2.07±0.19ng/ml、1.99±0.23ng/ml。大腸癌患者血清CTGF水平在浸潤腸壁深度各組間未見顯著性差異(p＞0.05)。 5大腸癌Dukes各分

13、期患者血清CTGF含量變化 Dukes分期A期5例、B期20例、C期29例、D期6例大腸癌患者血清CTGF平均水平分別為2.26±0.54ng/ml、2.17±0.61ng/ml、2.09±0.29ng/ml、1.98±0.71ng/ml。大腸癌患者血清CTGF水平在Dukes分期組各間未見顯著性差異(p＞0.05)。 結論： 1大腸癌患者血清CTGF含量與健康者相比未見顯著差異。但大腸癌患者血清CTGF含量較低

14、。 2大腸癌患者血清CTGF含量在根治手術前后無顯著變化。但術后有升高趨勢。 3大腸癌患者血清CTGF含量與大腸癌的分化程度、浸潤深度、Dukes病理分期、淋巴結轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移未見顯著關系。但隨著大腸癌分化程度的降低、浸潤深度的加深、Dukes病理分期的增高以及區(qū)域淋巴結轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，患者血清CTGF含量有下降趨勢。 4本實驗結果進一步證實第一部分的大腸癌組織較正常大腸上皮組織CTGF表達低；CTGF表達

15、越低，大腸癌的惡性程度越高、越易出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移的研究結果是正確的。 第三部分大腸癌結締組織生長因子表達與其細胞增殖活性及ALP、PKC和β-catenin蛋白含量關系的研究 目的：定量分析大腸癌組織CTGF不同表達情況下，大腸癌細胞增殖活性以及大腸癌細胞中ALP、PKC蛋白含量的變化。探討大腸癌細胞CTGF表達與大腸癌細胞增殖活性以及ALP、PKC和β-catenin蛋白表達的關系。進一步探明CTGF在大腸癌中的作

16、用機制，為大腸癌的綜合治療提供理論依據(jù)。 方法：應用流式細胞術(FCM)檢測CTGF高表達大腸癌標本66例，CTGF低表達大腸癌標本53例和正常大腸上皮標本30例中的大腸癌細胞增殖活性以及大腸癌細胞中ALP、PKC和β-catenin蛋白表達量。 結果： 1大腸癌細胞增殖活性(PI值)的分析 CTGF高表達的大腸癌細胞的增殖指數(shù)(PI=21.01±4.81)顯著高于正常大腸上皮細胞的增殖指數(shù)(PI=17.

17、13±2.60)(p＜0.05)；CTGF低表達的大腸癌細胞的增殖指數(shù)(PI=30.69±6.67)非常顯著的高于CTGF高表達的大腸癌細胞和正常大腸上皮細胞的PI值(p＜0.01)。 2大腸癌細胞中ALP蛋白含量分析 CTGF低表達的大腸癌細胞中ALP蛋白表達量(FI=1.51±0.20)非常顯著的高于CTGF高表達的大腸癌細胞((FI=1.17±0.14)和正常大腸上皮細胞中ALP蛋白表達量(FI=1.11±0.15