結(jié)締組織生長因子對體外培養(yǎng)肌腱細(xì)胞增殖和量效關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的：研究不同濃度的CTGF對體外培養(yǎng)肌腱細(xì)胞增殖的影響，探討CTGF參與肌腱損傷修復(fù)的可能機(jī)制。 方法：本實驗以成年兔后肢趾屈肌腱為材料，用酶消化后，將分離的細(xì)胞用含10﹪胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，貼壁達(dá)80﹪后傳代。觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長規(guī)律。取第二代細(xì)胞，通過免疫組化的方法進(jìn)行肌腱細(xì)胞鑒定。取第三代肌腱細(xì)胞，按細(xì)胞數(shù)約為4x10<'3>/孔接種在96孔培養(yǎng)板的48孔，每6孔為一組，共分為8組，根據(jù)每組CTGF濃度不同，分為5ng

2、/ml CTGF組、10ng/ml CTGF組、20ng/ml CTGF組、50ng/mlCTGF組、100ng/ml CTGF組、200ng/ml CTGF組、500ng/ml CTGF組及對照組(不加CTGF)。顯微鏡下觀察各組細(xì)胞均進(jìn)入對數(shù)生長期時，用噻唑藍(lán)(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法染色，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測出各孔吸光度(optical density，OD)值，并計算各組OD均值進(jìn)行比

3、較。 結(jié)果： MTF實驗通過比較各組OD值發(fā)現(xiàn)：5ng/mlCTGF組肌腱細(xì)胞增殖與對照組無顯著性差異；5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/mlCTGF組肌腱細(xì)胞增殖有隨CTGF濃度增加而上升的趨勢，且各組之間的差異均有顯著性(P<0.05)；50ng/ml、100ng/ml、200ng/mlCTGF、500ng/ml CTGF組肌腱細(xì)胞增殖有隨濃度增加而稍呈下降的趨勢，但各組之間的差異均無顯著性(P>0.0

4、5)。 結(jié)論： 10ng/mlCTGF、20ng/mlCTGF、50ng/mlCTGF、100ng/mlCTGF、200ng/mlCTGF、500ng/mlCTGF有促進(jìn)肌腱細(xì)胞增殖作用； 5ng/mlCTGF對肌腱細(xì)胞增殖無明顯作用。CTGF濃度在Ong/ml～50ng/ml之間時，肌腱細(xì)胞的增殖隨濃度增加呈上升趨勢；在50ng/ml～500ng/ml之間時，肌腱細(xì)胞的增殖隨濃度增加稍呈下降趨勢。50ng/ml為促肌腱細(xì)胞增殖