用H-22及CIA模型研究雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑減毒增效作用.pdf

1、目的：對(duì)比觀察雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑(簡(jiǎn)稱“透皮制劑”)與雷公藤片劑對(duì)小鼠H-22肝癌模型及小鼠CIA關(guān)節(jié)炎模型的治療和毒副作用，探討透皮制劑的減毒增效作用。 方法：H-22肝癌模型的建模采用小鼠體內(nèi)H-22肝癌細(xì)胞接種的方法，昆明種小鼠50只，18～22g，雄性，隨機(jī)分為五組，除空白組(A)外，其他各組皮下注射0.2ml肝癌細(xì)胞懸液(0.8×107/ml)，從注射肝癌細(xì)胞懸液的第2天起，分別與相應(yīng)的藥物，其中空白對(duì)照

2、組(A)和模型組(B)每只灌服生理鹽水(N.S)20ml/kg，雷公藤片劑組(C)灌服雷公藤片劑混懸液(含雷公藤甲素0.2mg/kg)，雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑低劑量組(D)與高劑量組(E)的小鼠背部和頸部用剪刀、脫毛霜脫毛涂藥，低劑量組為(含雷公藤甲素0.05mg/kg)，高劑量組為(含雷公藤甲素0.2mg/kg)，連續(xù)10d。第11天處死動(dòng)物，比較用藥組與模型組腫瘤重量，檢測(cè)血清ALT、AST等生化指標(biāo)，比較各組的睪丸臟器系

3、數(shù)，肝、腎、睪丸等病理組織學(xué)觀察，小鼠股骨骨髓片、精子涂片等分析，進(jìn)而對(duì)荷瘤小鼠減毒增效作用進(jìn)行綜合評(píng)估。 膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型采用膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎的方法：昆明種小鼠60只，18～22g，雄性，隨機(jī)分為6組：A組，空白對(duì)照組；B組，模型組，N.S(20ml/kg)灌胃/每只；C組，雷公藤片劑組，雷公藤片(含雷公藤甲素0.2mg/kg)混懸液灌胃/每只；D組，雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑低劑量組(含雷公藤甲素0.0

4、5mg/kg)透皮制劑涂搽加N.S(20ml/kg)灌胃/每只；E組，雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑中劑量組(含雷公藤甲素0.1mg/kg)透皮制劑涂搽加N.S(20ml/kg)灌胃/每只；F組，雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑高劑量組，(含雷公藤甲素0.2mg/kg)涂搽加N.S(20ml/kg)灌胃/每只。第25天處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，VEGF免疫組化染色觀察VEGF陽性著色及小鼠膝軟骨滑膜組織及血管增生情況，HE染色觀察小鼠膝軟骨滑

5、膜組織病理形態(tài)，眼球后靜脈叢取血檢測(cè)肝、腎等生化指標(biāo)，取心、腎標(biāo)本，HE染色觀察病理組織學(xué)改變，胃剝開后觀察形態(tài)，綜合評(píng)價(jià)雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑的減毒增效作用。 結(jié)果：1、免疫抑制及抗炎效應(yīng)：肝癌模型中各用藥組腫瘤重量均有增長(zhǎng)，模型組(0.92±0.99)，雷公藤片劑組(2.72±1.29)，透皮制劑組高劑量(2.86±0.68)，透皮制劑組低劑量(2.29±0.98)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.05，提示雷公藤

6、甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑和雷公藤片劑均可通過免疫抑制作用而致使皮下移植肝癌細(xì)胞增殖。CIA模型中，雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑和雷公藤片劑均有顯著的抗炎作用，表現(xiàn)為動(dòng)物的一般情況顯著改善，關(guān)節(jié)腫脹明顯減輕；病理組織學(xué)觀察到模型組動(dòng)物的關(guān)節(jié)面軟骨滑膜粘連明顯，雷公藤片劑組、透皮制劑高劑量組關(guān)節(jié)面接近正常；與模型組(7.80±2.12)相比，VEGF免疫組化染色示透皮制劑高劑量組(4.02±1.26)、片劑組3.66±1.68)的小鼠

7、膝關(guān)節(jié)滑膜血管增生(血管翳數(shù)量)顯著減少，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.05；透皮制劑高劑量組、片劑組的膝關(guān)節(jié)增生血管翳數(shù)量比較接近，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異不顯著，P＞0.05，提示雷公藤制劑對(duì)CIA早期的滑膜血管增生有抑制作用。 2、毒副反應(yīng)： 2.1肝毒性肝癌模型中雷公藤片劑組的血清AST(94.00±28.74)顯著高于空白組(44.75±10.99)，而雷公藤透皮制劑高劑量組(56.00±15.96)和低劑量組(5

8、2.50±12.51)顯著低于片劑組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.01。雷公藤片劑組的血清ALT(96.43±5.19)顯著高于空白組(45.00±7.25)，而雷公藤透皮制劑高劑量組(57.00±11.51)和低劑量組(48.60±18.64)顯著低于片劑組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.01。病理切片示雷公藤片劑組肝組織匯管區(qū)有炎性細(xì)胞增生，并且部分肝細(xì)胞有濁腫，透皮制劑組無明顯病理改變。CIA模型中，雷公藤片劑組ALT(91

9、.38±11.08)高于空白組(48.90±14.59)和模型組(47.38±7.01)，而透皮制劑高劑量組(46.40±39.35)、中劑量組(39.00±34.70)，和低劑量組(43.57±9.96)低于片劑組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.01。2.2腎毒性：CIA模型中BUN片劑組(12.53±2.45)顯著高于正常，且腎組織觀察到腎小管水腫等病理損害，而透皮制劑組BUN正常，且腎組織無明顯病理改變。 2.3生殖系統(tǒng)

10、毒性：H-22模型的精子數(shù)量片劑組(95.70±10.42)顯著低于模型組(180.75±24.20)和空白組(195.25±16.72)，而透皮制劑高劑量(160.50±13.26)和透皮制劑低劑量組(170.61±15.53)顯著高于片劑組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異顯著，P＜0.01。睪丸病理組織學(xué)觀察結(jié)果亦表明，片劑組切片中可見間質(zhì)有比較明顯的水腫，各級(jí)生精細(xì)胞減少，殘存的細(xì)胞排列紊亂，可見到細(xì)胞崩解消失后形成的空隙，在一些管腔中還可以

11、發(fā)現(xiàn)多核巨細(xì)胞，而透皮制劑高劑量組與透皮制劑低劑量組只有少許間質(zhì)水腫，未見各級(jí)生精細(xì)胞的減少和其他病理改變。 2.4骨髓系統(tǒng)毒性：各實(shí)驗(yàn)小鼠骨髓有核細(xì)胞增生都極度活躍，沒有發(fā)現(xiàn)骨髓抑制和誘變現(xiàn)象。 2.5心肌組織學(xué)改變：片劑組動(dòng)物心肌損傷明顯，心肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞空泡樣變性明顯，肌間隙變寬，部分心肌肌原纖維斷裂，少數(shù)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，而雷公藤甲素柔性納米脂質(zhì)體透皮制劑組心肌細(xì)胞變性和壞死程度和范圍明顯減