磁性多柔比星納米脂質(zhì)體的研制及體外細(xì)胞毒研究.pdf

1、目的： 1.研制出納米級(jí)的四氧化三鐵并研究其在動(dòng)物體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)、體內(nèi)臟器的分布和排泄。 2.用最佳的方法制備出納米級(jí)磁性多柔比星脂質(zhì)體并對(duì)其外部形態(tài)特征、粒徑大小、磁響應(yīng)性和藥物包封率進(jìn)行檢測(cè)。 3.選擇四氮唑鹽比色法(MTT法)和體外克隆形成法研究磁性多柔比星納米脂質(zhì)體對(duì)人大腸癌細(xì)胞的體外細(xì)胞毒作用。 方法： 1.自行設(shè)計(jì)用共沉淀法制備出納米級(jí)四氧化三鐵并進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測(cè)及磁性檢測(cè)。將納米級(jí)四

2、氧化三鐵靜脈注射到動(dòng)物體內(nèi)，用原子吸收光譜法測(cè)量血清中鐵的濃度，將血藥濃度—時(shí)間數(shù)據(jù)用3P87藥學(xué)程序進(jìn)行擬合，計(jì)算出藥物動(dòng)力學(xué)的各個(gè)參數(shù)。另將本品注入動(dòng)物體內(nèi)，按設(shè)定的時(shí)間處死動(dòng)物后用原子吸收光譜法測(cè)量不同臟器中的鐵含量。將四氧化三鐵磁液靜脈注射到動(dòng)物體內(nèi)，分別收集給藥前48小時(shí)和給藥后48小時(shí)內(nèi)的尿液和糞便，測(cè)量其中的鐵含量。 2.自行設(shè)計(jì)用反相蒸發(fā)法制備出納米級(jí)磁性多柔比星脂質(zhì)體，以正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在蒸發(fā)前對(duì)溶劑超聲粉碎、多柔

3、比星的濃度、蒸發(fā)后對(duì)混合液超聲和脂水相比例在四因素三水平的基礎(chǔ)上確定最佳包封率的制備工藝。用原子粒電鏡觀察其外部形態(tài)特征；用Zetapal無機(jī)粒度分析儀測(cè)量其粒徑分布；利用紫外—SephadexG-50法測(cè)定其包封率，利用磁測(cè)儀測(cè)量其磁響應(yīng)性。v3.利用自行研制的磁性多柔比星納米脂質(zhì)體，以體外培養(yǎng)的人大腸癌細(xì)胞為研究對(duì)象，采用四氮唑鹽比色法(MTT法)，觀察多柔比星、多柔比星脂質(zhì)體和磁性多柔比星納米脂質(zhì)體在有磁場(chǎng)和沒有磁場(chǎng)作用條件下濃度

4、和作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律的影響。利用體外克隆形成法在自行設(shè)計(jì)的循環(huán)裝置下進(jìn)行磁性多柔比星脂質(zhì)體的磁響應(yīng)性研究和對(duì)大腸癌細(xì)胞的殺傷率研究。 結(jié)果： 1.制備的納米級(jí)四氧化三鐵平均粒徑為10nm，磁響應(yīng)性高。動(dòng)物靜脈注射四氧化三鐵后呈雙室模型代謝。四氧化三鐵在動(dòng)物體內(nèi)主要分布在肝臟和脾臟等網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和吞噬細(xì)胞較多的臟器，并且在排泄緩慢。 2.磁性多柔比星脂質(zhì)體最佳工藝為蒸發(fā)前不進(jìn)行超聲粉碎、多柔比星的濃度為0.5m

5、g/ml、脂水相比為1：1.5和蒸發(fā)后進(jìn)行超聲粉碎20min，制作出的脂質(zhì)體包封率最高，在電鏡下為圓形或橢圓形，平均粒徑為293.4nm±20.6，包封率為30.8％±3.27，磁響應(yīng)性50.28emu。 3.在無磁場(chǎng)作用下多柔比星、多柔比星脂質(zhì)體和磁性多柔比星納米脂質(zhì)體對(duì)人大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制無明顯差異。外加磁場(chǎng)的作用下磁性多柔比星納米脂質(zhì)體對(duì)人大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制與多柔比星和多柔比星脂質(zhì)體有明顯差異。在磁場(chǎng)循環(huán)裝置下可見磁性多柔

6、比星脂質(zhì)體有較好的磁場(chǎng)響應(yīng)性，磁場(chǎng)作用下磁性多柔比星脂質(zhì)體對(duì)大腸癌細(xì)胞的殺傷率高于沒有磁場(chǎng)作用的殺傷率。 討論： 1.Fe3O4超微顆粒呈黑色顆粒，顆粒尺寸大約為10nm，粒度分布比較均勻，并且分散得非常好。在動(dòng)物體內(nèi)靜脈注射本品后呈雙室模型代謝；四氧化三鐵在動(dòng)物體內(nèi)的分布依次為：肝臟、脾臟、心臟和腎臟，主要是肝臟和脾臟等網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和吞噬細(xì)胞較多的臟器；四氧化三鐵在體內(nèi)排泄緩慢，可以從糞便和尿液排出體外。 2.