順鉑納米脂質(zhì)體放射增敏的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、概述惡性腫瘤是當(dāng)今嚴(yán)重威脅人類生命的疾病,目前腫瘤治療的主要手段有手術(shù)、放療、化療和生物治療,放療是一種主要的非手術(shù)治療方法,約有70％的患者在其病程的某一階段需要接受放療。因此,提高放療療效對提高腫瘤的臨床療效非常重要。提高放療療效主要可以從放射治療學(xué)的兩個大方面著手:放射物理和放射生物。提高腫瘤的放射敏感性是放射生物的一個主要研究方向,由此,放射增敏劑的研究應(yīng)運(yùn)而生。放射增敏劑定義為某種化學(xué)物質(zhì)或生物制劑,當(dāng)它們與放射線合并使用時,

2、可以增強(qiáng)放射線對腫瘤的殺傷的作用。順鉑是臨床常見的具有放射增敏作用的抗腫瘤藥物,但由于其到體內(nèi)迅速與血漿蛋白結(jié)合而限制了放射增敏作用的發(fā)揮。順鉑的緩釋制劑有望延長藥物的作用時間,增加療效,并降低毒性,本研究自制納米級脂質(zhì)體包裹的順鉑(nanoliposomal cisplatin,NLDDP),觀察其在小鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程,研究其體外和體內(nèi)的抗腫瘤作用及與放射聯(lián)合時的放射增敏作用,以為腫瘤的治療找到一種更為有效的放射增敏劑提供實(shí)驗(yàn)基

3、礎(chǔ)。
　　目的：觀察NLDDP在小鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程;研究NLDDP在體外對腫瘤細(xì)胞的活性抑制,觀察其聯(lián)合照射對腫瘤細(xì)胞體外生存的影響;在Lewis肺癌和B16黑色素瘤移植瘤小鼠模型中探討NLDDP與放射治療聯(lián)合時的在體抗腫瘤作用及放射增效價值;在Lewis肺癌移植瘤小鼠模型中探討NLDDP與放射聯(lián)合時的放射生物學(xué)效應(yīng)。
　　材料與方法：1.通過逆向蒸發(fā)法制備NLDDP,檢測照射后不同時間藥物的藥物體外釋放率。體內(nèi)藥物動

4、力學(xué)實(shí)驗(yàn)選用C57BL/6N近交系Lewis肺癌荷瘤小鼠,分成兩組,尾靜脈分別注射普通順鉑(CDDP)和LDDP,劑量均為6mg/kg。于注射后不同時間取血并處死動物,取腫瘤、腎、肝和肺組織。采用高效液相色譜法(HPLC)測定游離鉑的含量,石墨爐原子吸收光譜法測定腫瘤及正常組織中總鉑的含量。
　　2.選用人肺癌A549細(xì)胞系,通過MTT分析法檢測單純脂質(zhì)體、NLDDP和CDDP對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50);通過細(xì)胞集落形成觀察

5、NLDDP與放射聯(lián)合對腫瘤細(xì)胞生長的影響。
　　3.選用6～7周齡C57BL/6N近交系小鼠,分別接種Lewis肺癌和B16黑色素瘤。小鼠尾靜脈分別注射NLDDP和CDDP,6mg/kg,用藥后1、24、72小時進(jìn)行腫瘤局部不同劑量照射,觀察腫瘤生長延遲情況;Lewis肺癌荷瘤小鼠尾靜脈分別注入CDDP或NLDDP,在用藥后不同時間點(diǎn)上處死小鼠。取腫瘤組織,進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率。
　　4.選用Lewis

6、肺癌荷瘤小鼠,分成單純照射組、NLDDP聯(lián)合照射組、CDDP聯(lián)合照射組,每大組荷瘤小鼠又按照照射劑量不同分為亞組。觀察腫瘤生長情況,根據(jù)Compertz模型得出劑量效應(yīng)曲線,求出三組達(dá)到相同腫瘤生長延遲時間所需的照射劑量,單照組與藥物聯(lián)合照射組劑量之比即為放射增敏比。同時觀察藥物聯(lián)合照射對小腸損傷的生物效應(yīng)。C57BL/6N小鼠按給與藥物和照射劑量不同分組,進(jìn)行全腹照射。照射結(jié)束后3.5天處死小鼠,取小腸進(jìn)行切片,計(jì)數(shù)再生隱窩數(shù)。采用線

7、性二次(LQ)數(shù)學(xué)模型進(jìn)行細(xì)胞存活曲線擬合。放射增敏比為藥物聯(lián)合照射組和單純照射組生存曲線LQ方程的β值之比。藥物對腫瘤組織和對正常組織的放射增敏比之比為治療增益因子。
　　結(jié)果：1.深部X射線對NLDDP體外藥物釋放沒有明顯影響。血漿藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),CDDP組小鼠在注射后游離鉑立即達(dá)到最高血藥濃度3.24μg/ml,并迅速降低,2h后在血液中已經(jīng)無法檢測出游離鉑。NLDDP組小鼠注射后1h,血漿游離鉑達(dá)峰濃度13.79μg/

8、ml,是CDDP組峰濃度的4倍多。72h后血藥濃度為1.04μg/ml。腫瘤和正常組織中總鉑含量檢測發(fā)現(xiàn),NLDDP組荷瘤小鼠腫瘤組織中總鉑含量峰濃度達(dá)8.96±1.01mg/kg,明顯高于CDDP組的1.99±0.77mg/kg;在用藥后72小時內(nèi),NLDDP組中腫瘤組織中總鉑曲線下面積(AUC)顯著高于CDDP組,是它的7.48倍。在肝臟、肺及腎臟組織中,LDDP組AUC也高于CDDP組,分別是它的3.17倍、3.30倍和2.40倍

9、。
　　2.單純脂質(zhì)體外無細(xì)胞毒性;NLDDP對A549細(xì)胞的IC50為0.95μg/ml,毒性為CDDP(2.13μg/ml)的2.24倍;藥物聯(lián)合照射對腫瘤細(xì)胞增殖毒性大于單純用藥組和單純照射組,其中NLDDP聯(lián)合照射組腫瘤細(xì)胞的集落形成率低于CDDP聯(lián)合照射組。
　　3.在Lewis肺癌和黑色素瘤荷瘤小鼠中,NLDDP與CDDP比較均表現(xiàn)了更好的抗腫瘤作用。NLDDP與照射聯(lián)合,最長可以使Lewis肺癌荷瘤鼠的TGD時

10、間達(dá)15.29天,明顯長于CDDP聯(lián)合照射組的6.65(P=0.003)。用藥后不同時間照射,小鼠的腫瘤生長差異顯著,尤以用藥后72小時照射腫瘤生長緩慢。NLDDP與CDDP聯(lián)合照射可延長荷瘤小鼠的生存期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0001)。荷瘤小鼠靜脈注射NLDDP和CDDP后不同時間腫瘤組織流式細(xì)胞分析未發(fā)現(xiàn)差異。
　　4.在Lewis肺癌荷瘤小鼠中,NLDDP與CDDP與對照組均表現(xiàn)了更好的抗腫瘤作用,SER分別為4.92

11、和3.22。NLDDP與CDDP聯(lián)合照射對小腸上皮的損傷增加,SER分別為1.154和1.192。NLDDP與CDDP這兩種藥物聯(lián)合照射的的TGF分別為4.263和2.071。
　　結(jié)論：1.深部X射線對NLDDP體外釋放的速度無明顯影響;NLDDP靜脈注射后在體內(nèi)的循環(huán)時間長于CDDP,在腫瘤組織中的分布也高于CDDP組,說明NLDDP有長循環(huán)和被動靶向分布的作用。
　　2.本研究制備NLDDP所采用的脂質(zhì)成分體外無細(xì)胞毒