多柔比星-五味子乙素共載脂質(zhì)體克服腫瘤多藥耐藥的研究.pdf

1、背景:
　　腫瘤細胞對抗腫瘤藥物產(chǎn)生多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)是腫瘤化療失敗的主要原因，也是困擾腫瘤治療的一大難題。藥物載體作為一種新型的MDR逆轉(zhuǎn)策略，具有多種優(yōu)勢而成為研究熱點，前期多柔比星(Doxorubicin，DOX)脂質(zhì)體已被證明可部分克服腫瘤多藥耐藥。而從植物五味子提取的五味子乙素(Schisandrin B，Sch B)已被證明具有抑制P-gp和促進凋亡作用。
　　目的:<

2、br>　　本論文試制多柔比星-五味子乙素共載脂質(zhì)體(Doxorubicin-Schisandrin Bco-liposomes，DSCL)，探討五味子乙素與脂質(zhì)體對克服腫瘤MDR的協(xié)同作用。
　　方法:
　　探討其制劑的優(yōu)化、對多柔比星的細胞積聚、細胞攝取及細胞外排的影響，并分析該制劑克服腫瘤細胞MDR的可能機制，同時建立荷瘤耐藥小鼠以評價其藥效學(xué)。
　　結(jié)果:
　　首先采用硫酸銨梯度法制備DSCL，建立HPLC

3、藥物濃度測定方法，分別通過藥物磷脂比和磷脂膽固醇比優(yōu)化制備方法，最終獲得多柔比星包封率為93.96±3.30％，五味子乙素包封率為87.81±1.97％，粒徑為163±102nm，Zeta電位為-23±4mv，體外體外釋放實驗和體外穩(wěn)定性實驗說明DSCL符合后續(xù)研究。
　　然后，以人白血細胞系K562/DOX耐藥細胞為模型細胞，以多柔比星溶液(F-DOX)、五味子乙素+多柔比星混合液(Sch B+DOX)、多柔比星脂質(zhì)體(DOX-

4、L)、多柔比星脂質(zhì)體與五味子乙素混合液(DOX-L+Sch B)、維拉帕米+多柔比星混合液(Ver+DOX)為對照，分別比較DSCL組和對照組的細胞毒性不同，并測定不同時間點進入耐藥細胞的DOX藥物量差別，繪制藥物濃度隨時間變化曲線。結(jié)果顯示DSCL逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別是Sch B+DOX組、DOX-L組和DOX-L+SchB組的1.68、14.52和1.42倍。DSCL使DOX進入耐藥細胞K562/DOX的藥物量是DOX-L、Sch B+DO

5、X的1.30和1.21倍，且具有延緩?fù)馀抛饔?。說明DSCL具備良好的克服腫瘤多藥耐藥作用，脂質(zhì)體和五味子乙素顯示了良好的協(xié)同作用。
　　為了進一步了解DSCL克服腫瘤MDR機制，我們設(shè)計了內(nèi)吞抑制劑和低溫攝取實驗，結(jié)果顯示K562/DOX細胞攝取DSCL主要通過耗能的內(nèi)吞途徑。而P-gp表達和凋亡實驗證實了DSCL克服腫瘤MDR可能是通過抑制P-gp表達和促進凋亡雙通道途徑。
　　最后，運用K562/DOX細胞嫁接法建立了荷