熱缺血時間對無心跳供體大鼠胰島獲取和功能影響的實驗研究.pdf

1、目的: 胰島移植發(fā)展前景良好，但仍面臨著需要供胰量大、存活率較低，自身免疫性疾病復發(fā)所致移植物失功等問題。眾多因素影響胰島移植效果中，胰腺的缺血時間一直被認為是最重要的因素之一。大鼠與人的胰島在許多方面有著共同特點隨著胰腺移植例數(shù)的逐年增加，無心跳供體(non—heart—beating donor，NHBD)器官的利用成為熱點問題，NHBD供胰不可避免地經(jīng)歷了一段熱缺血損傷，探討供胰熱缺血損傷安全時限及其與術(shù)后移植物功能狀態(tài)的

2、關(guān)系有重要意義。然而，到目前為止對供胰耐受熱缺血時限仍缺乏定論，日本學者認為熱缺血的安全時限<30分鐘；美國學者則認為<15分鐘。本實驗旨在觀察不同熱缺血時間對大鼠胰島分離純化結(jié)果的影響，為臨床胰島移植供者的選擇提供依據(jù)。 材料與方法: 1、實驗動物及分組 本實驗采用雄性Wistar大鼠(中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供)，體重250～300g。大鼠秤重后，腹腔注射麻醉。腹部正中切口進腹。剪開膈肌，用血管鉗夾閉心臟基

3、底部致使心臟停搏，阻斷胸主動脈，造成無心跳供體(NHBD)的熱缺血模型。根據(jù)熱缺血時間的不同將大鼠隨機分為4組，每組10只。在大鼠心跳停搏后，第1組至第4組大鼠，分別為0分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘予以4℃ UW液保存8h，再將10 ml膠原酶溶液注入胰腺。 2、胰島的獲取 用UW液原位灌注大鼠胰腺后切取并放置于UW液中低溫保存。向大鼠胰管內(nèi)逆行灌注膠原酶溶液使胰腺充分膨脹，放在3711℃水浴中振蕩消化12—15

4、min。終止消化后，兩次離心洗滌，經(jīng)80目不銹鋼篩過濾，F(xiàn)icoll梯度離心法純化胰島，濃度分別為25％，23％，20.5％和11％，從23％和20.5％之間交界處及20.5％和11％之間交界處吸取胰島。 3、觀察指標 獲取的胰島用雙硫蹤(DTZ)染色來計算分離胰島數(shù)目并判斷所提胰島的純度，丫吮橙/澳乙陡(AO/EB)熒光染色法顯示胰島細胞活率，體外葡萄糖刺激下胰島素釋放試驗及兔抗鼠胰島素抗體免疫組織化學染色檢測胰島活性

5、。 4、統(tǒng)計學分析 將所得數(shù)據(jù)用均值±標準差表示，采取方差分析q檢驗，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件處理。 結(jié)果: NHBD大鼠熱缺血時間在30分鐘以內(nèi)各組獲得胰島的數(shù)量、純度、活率及活性與0分鐘組相比無明顯差別(P>0.05)。NHBD大鼠熱缺血時間在45分鐘組獲得胰島的數(shù)量、純度、活率及活性與0分鐘組相比有明顯差別(P<0.05)，低于臨床上的胰島移植標準(活性>75％，