缺血后處理對大鼠無心跳供體肺移植的保護(hù)作用.pdf

1、目的：建立大鼠無心跳供體肺移植動物模型，觀察尸體肺不同早期保護(hù)措施的保護(hù)效果；研究缺血后處理對肺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用并初步探討其保護(hù)機(jī)制。 材料與方法： 第一部分：64只大鼠隨機(jī)分成4組，即有心跳供體組(HBD組)，無心跳供體-供肺未采取保護(hù)措施組(NHBD-N組)，無心跳供體-供肺持續(xù)機(jī)械通氣組(NHBD-V組)和無心跳供體-供肺冰鹽水浸泡組(NHBD-Ⅰ組)；第二部分：40只大鼠隨機(jī)分成2組，對照組(NHBD

2、-C組)，即NHBD肺移植后直接開放肺動脈，和缺血后處理組(NHBD-S組)，即NHBD肺移植后肺動脈給予1min再灌-1min再阻斷，反復(fù)5次的后處理措施，然后全面恢復(fù)再灌注。 觀察指標(biāo)：術(shù)后短期存活率：觀察各組受體大白鼠左肺原位移植術(shù)后短期存活率，以術(shù)后2h心臟維持跳動為標(biāo)準(zhǔn)；在結(jié)扎右肺門前和結(jié)扎后15、30 min3個時間段測定肺順應(yīng)性、抽頸動脈血查血?dú)夥治霾⒂嬎阊鹾现笖?shù)；在結(jié)扎右肺門后1h或受體大白鼠死亡時，取移植的左肺

3、肺組織測定肺水含量、肺組織能量代謝物含量和形態(tài)學(xué)觀察；另外，第二部分在結(jié)扎右肺門后1h或受體大白鼠死亡時，取移植的左肺肺組織用 TUNEL 法行細(xì)胞凋亡檢測、用RT-PCR測定移植肺ICAM-1mRNA的表達(dá)和SOD、MDA含量的測定，并在電鏡下觀察移植肺組織超微結(jié)構(gòu)的改變。 統(tǒng)計方法：所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS12.0統(tǒng)計軟件自動分析，比較兩組之間的差異采用student t檢驗，多組間的差異比較采用單因

4、數(shù)方差分析；統(tǒng)計結(jié)果處理：以P<0.05表示差異有統(tǒng)計意義；P<0.01表示差異有高度統(tǒng)計意義。 結(jié)果： 1．術(shù)后短期存活率：第一部分和第二部分各組術(shù)后短期存活率均很高，組間無明顯差異，p>0.05。 2．肺順應(yīng)性：在第一部分，NHBD-N組與HBD組比較移植后肺順應(yīng)性較差(P<0.01)，而NHBD-V和NHBD-Ⅰ組與HBD組比較無顯著差異；在第二部分，NHBD-S組移植術(shù)后肺順應(yīng)性較NHBD-C組要高，兩組

5、比較在結(jié)扎右肺門前(P<0.05)和結(jié)扎后15min(P<0.01)差異具有顯著性。 3．動脈血?dú)夥治觯涸诘谝徊糠?，?shí)驗結(jié)果顯示各組之間肺功能指標(biāo)相差不大，NHBD-N組在結(jié)扎右肺門后30 min與HBD組比較PaO2較低，有顯著差異(P<0.05)。其余比較未見顯著差異；在第二部分，NHBD-S組左肺移植術(shù)后鼠肺功能指標(biāo)較NHBD-C好(P<0.05)。 4．肺水含量：在第一部分，NHBD-N與其它各組比較肺濕/干重比

6、值高，差異具有顯著性(P<0.01)。其它3組間無差異性；在第二部分，實(shí)驗結(jié)果顯示NHBD-S組左肺移植術(shù)后鼠肺濕/干重比值明顯較NHBD-C低，兩者差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)。 5．肺組織中能量代謝物的含量：實(shí)驗結(jié)果顯示與HBD比較，其它各組肺能量代謝物都有所減低，但 NHBD-Ⅰ組相對肺能量代謝物的保存較NHBD-N和NHBD-V組要好，而NHBD-N組最差(P<0.01)。 6．光鏡檢查：在第一部分，實(shí)驗結(jié)

7、果顯示NHBD-N和NHBD-V組與HBD組比較，炎性細(xì)胞浸潤程度和肺損傷程度較重，而NHBD-Ⅰ組與HBD組較接近；在第二部分，兩組肺移植術(shù)后均出現(xiàn)肺泡水腫，炎性細(xì)胞滲出，毛細(xì)血管破裂出血，肺間質(zhì)水腫等等病理改變，但NHBD-S組損傷較輕。 7．移植肺細(xì)胞凋亡檢測：NHBD-S組細(xì)胞凋亡的程度較NHBD-C組明顯減輕，兩者之間具有高度差異性(P<0.01)。 8．肺組織SOD、MDA含量的檢測：NHBD-S組MDA含量

8、較NHBD-C低，而SOD含量較NHBD-C組高，差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 9．移植肺ICAM-1 mRNA表達(dá)：實(shí)驗結(jié)果顯示NHBD-C組移植術(shù)后肺組織ICAM-1 mRNA含量高于NHBD-S組(P<0.01)。 10．電鏡超微結(jié)構(gòu)的改變：NHBD-S組肺超微結(jié)構(gòu)的病變損傷較NHBD-C組輕。 結(jié)論： 1．用“兩套管一支架管”法建立大鼠NHBD左肺原位移植模型是一種簡單有效的方法，該模

9、型適用于肺移植早期相關(guān)問題的研究。 2．熱缺血30 min大白鼠無心跳供體肺適于肺移植。在建模過程中，供、受體大白鼠無需常規(guī)全身肝素化。 3．大鼠NHBD肺在熱缺血時給予持續(xù)機(jī)械通氣或胸腔低溫浸泡都可取得良好的肺保護(hù)效果，而胸腔低溫浸泡的肺保護(hù)效果要稍優(yōu)于持續(xù)機(jī)械通氣。 4．缺血后處理對無心跳供體肺移植具有保護(hù)作用，可減輕肺移植術(shù)后缺血再灌注損傷，減輕肺水腫、改善肺順應(yīng)性和保存移植肺肺功能和結(jié)構(gòu)。 5．缺

10、血后處理肺保護(hù)機(jī)制包括：抑制肺移植術(shù)后脂質(zhì)過氧化反應(yīng)減輕肺水腫；下調(diào)ICAM-1 mRNA的表達(dá)水平，抑制炎癥反應(yīng)和中性粒細(xì)胞活化；抑制肺移植術(shù)后細(xì)胞凋亡等。 創(chuàng)新和意義： 1．本研究在建立大鼠NHBD左肺原位移植模型的基礎(chǔ)上，首次研究并比較尸體肺不同早期保護(hù)措施的效果。 2．本研究在實(shí)驗過程中證實(shí)熱缺血30 min大白鼠無心跳供體肺適于肺移植，并提出在建模過程中，供、受體大白鼠無需常規(guī)全身肝素化。 3．