不同器官保存液對(duì)大鼠無心跳供肝保存效果的比較研究.pdf

1、本研究的目的是： 1．建立穩(wěn)定可靠的重建肝動(dòng)脈的大鼠肝移植模型。 2．比較Universityofwisconsin(UW)液、Histidine-tryptophan-ketoglutarate(HTK)液與telsior(CS)液對(duì)大鼠無心跳供體(non-heart—beatlngdonor，NHBD)供肝的保存效果。 3．對(duì)CS液中添加重組人肝細(xì)胞生長因子(recombinanthumanhepatocyt

2、egrowthfactor，rhHGF)進(jìn)行了對(duì)比研究，探討rhHGF在CS液中對(duì)NHBD供肝的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。 方法： 大鼠肝移植模型參照目前常用的“二袖套”法加以修改，并利用微支架管重建肝動(dòng)脈。采用鉗夾大鼠胸主動(dòng)脈與膈上下腔靜脈lOmin的方法來誘導(dǎo)供肝熱缺血作為NHBD供肝模型。通過膽汁計(jì)量、計(jì)算肝組織含水量、自動(dòng)生化儀測(cè)定肝酶水平、熒光發(fā)光微量檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)肝組織ATP含量、放免法檢測(cè)血清田一1水平、抗體夾心

3、ELISA法檢測(cè)血清炎性細(xì)胞因子TNF-α與IL-1的濃度、常規(guī)H&E染色病理組織學(xué)檢查、透射電鏡觀察膽管上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化、觀察大鼠生存率等多個(gè)方面比較上述三種器官保存液在冷缺血時(shí)間為8h與16h條件下對(duì)NHBD供肝的保存效果，并比較CS液添加rhHGF方案是否能增強(qiáng)其對(duì)NHBD供肝的保存效果，并采用TUNEL法檢測(cè)受體大鼠肝細(xì)胞凋亡、抗體夾心ELISA法檢測(cè)受體大鼠血清中INF-γ、IL-4與IL-10的水平以及逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反

4、應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肝組織相應(yīng)細(xì)胞因子(INF-γ、IL一4與工L一10)mRNA的表達(dá)來探討rhHGF可能的抗冷熱缺血機(jī)制。 結(jié)果： 1．我們建立的重建肝動(dòng)脈的大鼠肝移植模型，3周生存率高達(dá)92．1％，肝動(dòng)脈3周通暢率為91．4％。 2．保存8h的NHBD供肝移植后，HTK組與CS組膽汁產(chǎn)生量在門靜脈再通1h明顯多于UW組(p<0．05)；各組肝組織含水量在再通1h、3h、6h時(shí)間點(diǎn)差異無顯著性(p>0．05

5、)；HTK組與CS組血清ALT與AST水平在門靜脈再通1h、3h與6h明顯低于UW組(p<0．05)；Uw組肝組織ATP水平在門靜脈再通1h與3h明顯低于HTK組與CS組(p<0．05)，再通6h則差異無顯著性(p>0．05)；UW組血清盯一1水平在門靜脈再通1h與3h明顯高于HTK組與CS組(p<0．05)，在再通6h則差異無顯著性(p>0．05)；UW組血清TNF-a與IL一1水平在門靜脈再通1h與3h明顯高于HTK組與CS組(p<

6、0．05)，在再通6h時(shí)間點(diǎn)則差異無顯著性(p>O．05)；與UW組相比，病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)HTK組和CS組保持了相對(duì)良好的肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)、較輕的門靜脈充血及炎性細(xì)胞的浸潤；超微結(jié)構(gòu)顯示cs組膽管上皮細(xì)胞線粒體腫脹明顯比Uw組及HTK組輕；生存分析表明UW組、HTK組與CS組的7天生存率分別為25．0％，33．3％和58．3％，HTK組與CS組明顯優(yōu)于UW組(p<0．05)。 3．保存16h的NHBD供肝移植后，三組間在門靜脈再通1

7、h、3h與6h的膽汁分泌量、肝組織含水量、血清ALT與AST水平、肝組織ATP含量、血清ET-1水平以及炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL～l水平差異均無顯著性(p>0．05)；病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)三組肝組織損傷程度無明顯差別，均出現(xiàn)嚴(yán)重的肝細(xì)胞變性壞死、肝竇淤血、門靜脈充血、炎性細(xì)胞浸潤等；所有受體均在3天內(nèi)死亡，三組生存分析差異無顯著性(p>O．05)。 4．添加rhHGF的CS液試驗(yàn)組在門靜脈再通lh的膽汁產(chǎn)生量以及肝組織ATP含

8、量明顯高于對(duì)照組(p<0．05)；肝組織含水量以及血清ALT與AST水平明顯低于對(duì)照組(p<0．05)；肝組織損傷在肝細(xì)胞變性壞死、肝竇擴(kuò)張、門靜脈充血、炎性細(xì)胞浸潤等方面明顯較對(duì)照組減輕；試驗(yàn)組肝細(xì)胞凋亡明顯減少；血清INF—Y水平明顯低于對(duì)照組(p<0．05)，IL一4與IL—10水平明顯高于對(duì)照組(p<0．05)；肝組織INF-γmRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(p

9、