新型SMO多器官保存液在大鼠肝臟保存中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文共分為三章： 第一章新型SMo保存液中聚乙二醇分子量及濃度的選擇 目的：探討新型SMO保存液中聚乙二醇的最佳分子量和濃度。 材料和方法：大鼠肝臟原位灌注切取后在不同SMO保存液中4℃保存24h，保存終點(diǎn)行肝臟組織病理學(xué)檢查和評(píng)分，比較含不同分子量、不同濃度聚乙二醇(PEG)的SMO保存液對(duì)大鼠肝臟冷保存的效果。將人靜脈血與含不同分子量、不同濃度PEG的SMO保存液混合，通過(guò)自動(dòng)血沉分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞沉降率、自動(dòng)

2、血液流變儀檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)、光鏡觀察紅細(xì)胞聚集的形態(tài)學(xué)改變，分析PEG對(duì)紅細(xì)胞聚集性和血液流變學(xué)的影響。 結(jié)果：在相同濃度下，含PEG35KDa(PEG35)的SMO保存液對(duì)大鼠肝臟的低溫保存效果優(yōu)于含：PEG20KDa(PEG20)的保存液，其中PEG35(1g/L)的保存效果最好。含低濃度PEG的SMO保存液對(duì)紅細(xì)胞聚集性和血液流變學(xué)的影響較?。欢琍EG20(30g/L)、PEG35(10g/L)和PEG35(30g/L

3、)的保存液則可顯著加快紅細(xì)胞沉降率，增加血液粘滯度，引起紅細(xì)胞明顯聚集。 結(jié)論：PEG35(1g/L)是新型SMO保存液中PEG的最佳選擇。 第二章大鼠肝臟離體再灌注模型的建立及改進(jìn) 目的：建立大鼠肝臟離體再灌注模型，為器官保存液的研究提供可靠平臺(tái)。材料和方法：在國(guó)外同類系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)，建立適合我國(guó)國(guó)情的長(zhǎng)征-1(CZ-1)型大鼠肝臟離體再灌注系統(tǒng)。隨后對(duì)系統(tǒng)的有效性和可靠性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。大鼠肝臟經(jīng)

4、門靜脈、膽道分別插管后切取，通過(guò)CZ-1型離體再灌注系統(tǒng)在37℃條件下以20ml/min的流量經(jīng)門靜脈循環(huán)灌注Krebs-Henseleit液120min。觀察肝臟膽汁分泌量和組織病理學(xué)改變，探討大鼠肝臟離體再灌注模型的有效性和可靠性。結(jié)果：CZ-1型大鼠肝臟離體再灌注系統(tǒng)價(jià)格低廉、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性能可靠。離體再灌注肝臟的膽汁分泌量為0.248±0.094 ul/min·g(肝組織)，與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道類似。再灌注肝臟組織病理學(xué)無(wú)明顯改變。

5、 結(jié)論：大鼠肝臟離體再灌注模型是器官保存液研究的理想模型。CZ-1型大鼠肝臟離體再灌注系統(tǒng)簡(jiǎn)單有效，可替代國(guó)外進(jìn)口系統(tǒng)。 第三章新型SMO保存液在大鼠肝臟保存中的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討新型SMO保存液對(duì)大鼠肝臟的保存效果。 材料和方法：大鼠肝臟原位灌注切取后，在UW液和SMO液中4℃分別保存24、48、72h，冷保存終點(diǎn)行肝臟組織病理學(xué)檢查、保存液pH值和滲透壓測(cè)定、肝臟增重檢測(cè)，探討SMO保存液的冷保存效果。

6、另一部分大鼠肝臟原位灌注切取后，在乳酸林格液、UW液和SMO液中4℃保存24h，未冷保存組為對(duì)照，冷保存后通過(guò)離體再灌注系統(tǒng)，在37℃條件下以20ml/min的流量經(jīng)門靜脈循環(huán)灌注Krebs-Henseleit液120min，通過(guò)生化檢測(cè)觀察灌注液中ALT、AST、LDH的改變，灌注結(jié)束后通過(guò)光鏡、電鏡觀察肝臟組織病理學(xué)改變，通過(guò)TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)凋亡情況，通過(guò)免疫組化檢測(cè)肝組織中NF-κB、ICAM-1、Caspase-3的表達(dá)，探討

7、SMO保存液在減輕肝臟冷缺血再灌注損傷中的作用。 結(jié)果：冷保存24h后，SMO液組與Uw液組的肝臟保存效果類似；冷保存48h后，SMO液組的肝臟保存效果略差于UW液組，但無(wú)顯著性差異。冷保存24、48、72h后，SMO液組的肝臟增重分別為5.53±4.21％、6.57±3.24．％和8.22±2.96％，而UW液組的肝臟增重為-8.04±6.42％、-12.31±7.61％和-18.58±8.80％。冷保存24、48、72h后，

8、SMO液組pH值分別為7.23±0.04、7.07±0.05、6.98±0.04，而UW液組pH值分別為7.12±0.04、6.93±0.05、6.82±0.04，但兩者緩沖能力類似。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，SMO液組的滲透壓緩慢升高，而UW液組的滲透壓升高較快。在冷保存24h后，兩組的酶學(xué)指標(biāo)無(wú)明顯性差異，但灌注120min后，SMO液組ALT值低于UW液組，而AST和LDH則高于UW液組。離體再灌注120min后，SMO液組的光鏡組織病