新型SMO多器官保存液對(duì)大鼠腎臟保存效果的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分新型SMO多器官保存液的配制和理化性質(zhì) 目的：闡述SMO多器官保存液配方選擇的理論依據(jù)及其基本理化性質(zhì)。 材料和方法：新型SMO多器官保存液是在全面分析UW液和HTK、IGL-1等成功保存液配方的基礎(chǔ)上，吸取國內(nèi)外其它器官保存液的優(yōu)點(diǎn)，遵循保存液配制的原則，結(jié)合器官保存領(lǐng)域理論的新進(jìn)展，簡化改良上述先進(jìn)保存液的成分，在前期系列研究的基礎(chǔ)上，經(jīng)過反復(fù)配制而成。SMO液由長征醫(yī)院制劑中心進(jìn)行配制，采用高溫高壓(109

2、℃，45分鐘)消毒。配制后測定滲透壓和PH值，采用健康人全血與新型SMO多器官保存液混合后檢測血沉及紅細(xì)胞聚集形態(tài)學(xué)觀察，分別采用生理鹽水和UW液作對(duì)照。 結(jié)果：在常溫下和低溫保存過程中各組分穩(wěn)定，為澄清、無色的無菌溶液。PH值7.4，滲透壓320 mOsm/L。SMO液對(duì)血沉無影響，與SMO液混合的紅細(xì)胞均呈單個(gè)分散狀態(tài)，無紅細(xì)胞聚集現(xiàn)象。 結(jié)論：新型SMO多器官保存液具有理論上的先進(jìn)性，配制后的液體穩(wěn)定，粘滯度低，對(duì)

3、血沉影響小，無紅細(xì)胞聚集作用。 第二部分 SMO液與UW液對(duì)大鼠腎臟冷保存的對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究 目的：與UW液對(duì)比，觀察SMO保存液對(duì)大鼠腎臟冷保存效果。 材料和方法：大鼠腎臟原位灌注切取后，在0-4℃SMO保存液和UW液中分別保存24、48、72h，于各冷保存終點(diǎn)行腎臟含水量測定、腎臟組織病理學(xué)檢查及保存液PH值測定，并同UW液進(jìn)行比較，觀察、評(píng)價(jià)SMO保存液對(duì)大鼠腎臟的冷保存效果。 結(jié)果：冷保存24h后，U

4、W液、SMO液與無保存對(duì)照組相比，組織含水量均無顯著性差異(68.43±1.32％vs．69.38+±1.01％vs．69.42±+1.20％，P=0.346)；保存48h后UW液、SMO液兩組比較，組織含水量無顯著性差異(69.11±0.93％vs．69.78±1.15％，P=0.297)；保存72h后SMO液組含水量顯著高于UW液(71.04±+1.25％vs．69.39±1.29％，P=0.48)。在保存的各時(shí)段內(nèi)，SMO液與UW

5、液兩組腎臟病理的形態(tài)學(xué)改變均無顯著差別。冷保存24h后，SMO液和UW液PH值均下降，但無顯著差異(7.29±0.02 vs．7.29±0.01，P=0.752)，冷保存48h和72h后，SMO液PH值顯著高于UW液，分別為7.14±0.01 vs．7.19±0.02，(P＜0.001)和6.94±0.12vs．7.12±0.01(P=0.004)。 結(jié)論：SMO液冷保存后大鼠腎臟組織學(xué)改變與UW液保存無差別，保存時(shí)間較長(72

6、h)時(shí)，在防止組織水腫方面不如UW液，但是酸堿緩沖能力優(yōu)于UW液。 第三部分大鼠腎臟離體灌注模型的建立 目的：建立簡便可靠的大鼠腎臟離體灌注模型，為今后器官保存液的研究提供平臺(tái)。 材料和方法：在針對(duì)腎臟離體灌注原理，參照國外同類系統(tǒng)構(gòu)造的基礎(chǔ)上，建立自制的大鼠腎臟離體灌注系統(tǒng)，熟悉大鼠腎臟的摘取和灌流液的制備，并對(duì)該系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)際的操作。 結(jié)果：該自制的大鼠腎臟離體灌注模型成功建立，簡單方便，有效，價(jià)格便宜

7、。 結(jié)論：該自制大鼠腎臟離體灌注系統(tǒng)可以作為進(jìn)一步研究的平臺(tái)。 第四部分大鼠腎臟離體灌注模型的穩(wěn)定性試驗(yàn) 目的：觀察自制大鼠腎臟離體灌注系統(tǒng)工作的可靠性和穩(wěn)定性。 材料和方法：對(duì)無保存大鼠腎臟進(jìn)行離體灌注的實(shí)際操作，灌注時(shí)間為120分鐘，每15分鐘采集灌流液及尿液標(biāo)本，計(jì)算灌流率(PFR)，尿流率(UFR)，鈉重吸收率(FRNa+)，利用肌酐清除率來計(jì)算腎小球?yàn)V過率(GFR)，測定灌流液中乳酸脫氫酶含量，

8、并將灌注后的腎臟行病理檢查。 結(jié)果：灌流裝置連續(xù)工作期間，灌流泵和恒溫裝置工作穩(wěn)定，溫度恒定于37℃，灌注壓力控制于90-110mmHg。在灌流過程中，尿液不斷地排出。各功能性指標(biāo)如PFR、UFR、FRNa+和GFR基本保持相對(duì)穩(wěn)定。隨著再灌注時(shí)間延長，灌流液中LDH含量逐漸升高，于灌注末達(dá)57.8±14.3U/L，灌注結(jié)束后腎臟有較多的小管擴(kuò)張和脫落，評(píng)分較正常對(duì)照組稍差。 結(jié)論：該自制大鼠離體灌注模型性能穩(wěn)定，可靠，

9、能很好地對(duì)體外。腎臟進(jìn)行灌流，灌流液能提供一定的能量和氧量，在短時(shí)間內(nèi)能腎臟基本代謝所需，為保存液的研究提供了可靠的平臺(tái)。 第五部分 SMO液與UW液對(duì)大鼠腎臟離體再灌注損傷保護(hù)作用的對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討和比較SMO液和UW液對(duì)大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。 材料和方法：大鼠腎臟在0-4℃SMO保存液和UW液中保存24h，無保存組為對(duì)照，采用大鼠腎臟離體灌注模型，對(duì)腎臟進(jìn)行90min常溫再灌注。灌注過程

10、中收集灌流液及尿液標(biāo)本，計(jì)算各功能性指標(biāo)如PFR、UFR、FRNa+、GFR和LDH，灌注結(jié)束后通過光鏡、電鏡觀察腎臟組織病理學(xué)改變，通過TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況，通過免疫組化檢測腎組織中NF-κB、Bcl-2的表達(dá)情況。 結(jié)果：經(jīng)過24h的冷保存，UW液組與SMO液組兩組PFR相比無顯著性差異(12.14±1.1ml/min/g vs．12.04±1.1 ml/min/g，P=0.589)，均明顯低于對(duì)照組(21.74±1

11、.1ml/min/g，P＜0.001)。UFR相比無顯著性差異(47.1±4.2ul/min/g vs．46.24±5.6ul/min/g，P=0.421)，均明顯低于對(duì)照組(84.9±4.6 ml/min/g，P＜0.001)。GFR相比無顯著性差異(94.4±8.1ul/min/g vs．92.6±10.9 ul/min/g，P=0.638)，并且均明顯低于對(duì)照組(425.34±23.1 ml/min/g，P＜0.001)。UW液組

12、FRNa+顯著低于SMO液組(35.6±3.0％vs．76.8±2.3％，P＜0.001)，都明顯低于對(duì)照組(91.4±1.5％，P＜0.001)。在灌流的30、60、90min時(shí)，UW液組和SMO組中的灌流液中LDH含量均顯著高于對(duì)照組(P＜0.001)，但UW液和SMO液兩組間均無顯著差異(P＞0.05)；UW和SMO兩組在灌流結(jié)束后腎臟病理的光鏡和電鏡比較無明顯差別(P=0.572)。三組凋亡率比較有顯著性差異(P＜0.001)，

13、SMO組大于對(duì)照組(P＜0.001)，UW液大于SMO組(P=0.027)。免疫組化結(jié)果表明，三組腎臟bcl-2的表達(dá)無顯著差別(P=0.114)，NF-κB的表達(dá)有顯著差別(P=0.004)，SMO組低于UW組(P=0.002)，與對(duì)照組無差別(P=0.478)。 結(jié)論：新型SMO保存液對(duì)冷保存24h大鼠腎臟離體再灌注后功能和組織結(jié)構(gòu)方面的影響和UW差不多，能減輕缺血再灌注損傷，在保持腎小管功能，減少細(xì)胞凋亡，減少炎癥反應(yīng)方面