葎草總黃酮對乳腺上皮細胞相關(guān)炎癥和泌乳基因表達的影響.pdf

1、為研究葎草總黃酮對乳腺上皮細胞相關(guān)基因表達的影響，本實驗將奶牛乳腺上皮細胞作為細胞模型，利用MTT法檢測細胞的活率及生長狀況，分別用不同濃度的黃酮溶液(0、100、200、400、600、800mg/L)刺激奶牛乳腺上皮細胞12h，再用相同濃度的黃酮溶液（400mg/L）作用于奶牛乳腺上皮細胞不同時間(0h、1h、4h、9h、12h、16h、24h)，分別提取細胞的總RNA，運用熒光定量PCR法測定GHR、β-CN、IL-6、IL-8、

2、TNF-α和IFN-γ泌乳相關(guān)基因的表達并進行研究。得出如下結(jié)果：
　　1)細胞生長到第4d時，存活的細胞數(shù)最多，在第4d以后，存活的細胞數(shù)量呈下降趨勢，符合MTT法檢測細胞生長的一般規(guī)律。
　　2)不同濃度的黃酮溶液刺激奶牛乳腺上皮細胞12h后，IL-6在黃酮濃度為100-800mg/L時表達量降低且差異均顯著（P＜0.05），但在800mg/L時表達量最低；IL-8的表達量在黃酮濃度為800mg/L時也有所降低，但差異不

3、顯著（P＞0.05）；在黃酮濃度為100-600mg/L時TNF-α的表達量都降低，但在200mg/L時表達量最低（P＜0.05）；IFN-γ的表達量在黃酮濃度為200-400mg/L時有所降低，但在200mg/L時其表達量最低（P＜0.05）。
　　3)不同濃度的黃酮溶液刺激奶牛乳腺上皮細胞12h后，黃酮濃度在200mg/L時促進GHR的表達，但差異不顯著（P＞0.05）；在黃酮的濃度為100-800mg/L時對β-CN的表達有

4、上調(diào)的作用，200-600mg/L的黃酮濃度對β-CN的表達可顯著提高（P＜0.05），但在黃酮濃度為400mg/L時，β-CN的表達量最高。
　　4)相同濃度（400mg/L）的黃酮溶液作用于乳腺上皮細胞不同時間，IL-6在作用于細胞4-9h時表達量降低（P＜0.05），但在作用9h時表達量顯著降低；IL-8在作用1h時表達量降低，差異顯著（P＜0.05）；TNF-α在作用1-24h時表達量都降低，但在12h時，其表達量降低明顯

5、（P＜0.05）；IFN-γ的表達量在作用細胞1-24h時也降低，但在12h時降低顯著（P＜0.05）。
　　5)相同濃度（400mg/L）的黃酮溶液作用于乳腺上皮細胞不同時間，在作用于細胞4-9h時對GHR的表達都有促進作用，但在作用4h時其表達明顯升高（P＜0.05）；在作用4-12h時，對β-CN的表達也有促進作用且差異顯著（P＜0.05），但在作用12h時表達量最高。
　　本研究可以得出如下結(jié)論：
　　1)對奶

6、牛乳腺上皮細胞進行培養(yǎng)，在第4d時，此細胞的存活力最強。
　　2)葎草黃酮對乳腺上皮細胞相關(guān)炎癥因子的表達與其劑量及作用時間有關(guān)，黃酮濃度為800mg/L，作用于乳腺上皮細胞(MAC-T)9h后，可以顯著地降低IL-6炎癥因子的表達；黃酮濃度為200mg/L，作用時間12h后，能顯著地降低TNF-α和IFN-γ的表達。這對乳腺細胞相關(guān)炎癥基因的表達可能有一定的抑制作用。
　　3)培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞第4天時，細胞的存活力最強