蛋氨酸對(duì)熱處理下體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同濃度蛋氨酸作用于熱處理后的體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行研究，測(cè)定其對(duì)乳腺上皮細(xì)胞增殖、抗氧化性、凋亡及相關(guān)基因與蛋白表達(dá)方面的影響，從細(xì)胞水平探討蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激下奶牛乳腺的保護(hù)作用。本試驗(yàn)分為兩個(gè)部分:
　　1、蛋氨酸對(duì)熱處理及非熱處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、抗氧化性能的影響。
　　用兩組含不同濃度(0、30、60mg/L)蛋氨酸的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞2d后，37℃組用37℃水浴0.5h，42℃組（熱處理組）

2、42℃水浴0.5h，恢復(fù)6h，通過(guò)MTT測(cè)定高溫?zé)崽幚韺?duì)體外培養(yǎng)乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響，培養(yǎng)液中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(AT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活性以及細(xì)胞凋亡率。結(jié)果表明，與37℃組相比，42℃組MDA含量、NO含量、NOS活力、LDH活性均升高;細(xì)胞活力、SOD活性、CAT活性下降，GSH-Px酶活力升高。與0mg/L

3、蛋氨酸組相比，添加60mg/L蛋氨酸組的細(xì)胞活力升高(P＜0.05);LDH活性顯著降低(P＜0.05);尤其MDA、NO、NOS含量極顯著降低(P＜0.01);添加30mg/L、60mg/L蛋氨酸能增加熱處理下乳腺上皮細(xì)胞CAT活性(P＜0.05);SOD中，60mg/L蛋氨酸組含量最高（P＜0.05）;培養(yǎng)液中GSH-Px活性，60mg/L蛋氨酸組最高(P＜0.01)。這說(shuō)明42℃0.5h熱處理使細(xì)胞產(chǎn)生了熱應(yīng)激，細(xì)胞受到氧化應(yīng)激，

4、有氧自由基含量上升。添加蛋氨酸可以有效緩解細(xì)胞熱應(yīng)激損傷，減少氧化應(yīng)激。
　　2、蛋氨酸對(duì)熱處理及非熱處理乳腺上皮細(xì)胞凋亡、相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響。
　　用含不同濃度(0、30、60mg/L)蛋氨酸的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞2d后，42℃水浴0.5h后立即放回37℃恢復(fù)培養(yǎng)6h，測(cè)定細(xì)胞凋亡、HSF-1 mRNA、HSP70mRNA、Bax/Bcl-2mRNA的表達(dá)、HSP70蛋白的表達(dá)以及Caspase-3的活性。結(jié)果表明

5、，流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡，與0mg/L蛋氨酸組相比，添加30、60mg/L蛋氨酸能顯著降低細(xì)胞晚期凋亡/壞死率(P＜0.05)，總死亡率差異極顯著(P＜0.01);60mg/L蛋氨酸組HSF-1mRNA、HSP70mRNA表達(dá)量、HSP70蛋白的表達(dá)顯著升高(P＜0.01);降低了Bax/Bcl-2mRNA的表達(dá)量以及Caspase-3的活性(P＜0.01)。結(jié)論:培養(yǎng)基中添加60mg/L蛋氨酸能促進(jìn)高溫條件下乳腺上皮細(xì)胞增殖，起到抗凋