谷氨酰胺對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖及HSP70表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗(yàn)用不同劑量的谷氨酰胺（Gln）體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，分別檢測(cè)在正常培養(yǎng)溫度和高溫應(yīng)激條件下細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖情況及HSP70 mRNA的表達(dá)水平，旨在探討不同劑量的Gln對(duì)體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、減緩應(yīng)激損傷的作用及其與細(xì)胞HSP70 mRNA的表達(dá)的關(guān)系.本研究分為兩個(gè)部分：
　　 一、不同濃度的谷氨酰胺對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖及HSP70 mRNA表達(dá)的影響
　　 收集37℃，細(xì)胞培養(yǎng)基中G

2、ln添加劑量依次為0，0.0625，0.25，0.5，2，4，8mmol/L的奶牛乳腺上皮細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，比色法檢測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）活性，RT-PCR分析Bcl-2/Bax及HSP70 mRNA的表達(dá)量。進(jìn)而研究Gln對(duì)體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的作用及其與熱休克蛋白（HSP）70表達(dá)的關(guān)系。本研究結(jié)果表明，體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞其活性受Gln添加劑量的影響。Gln添加劑量為2 mmol/L

3、時(shí)，檢測(cè)的細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)，Bcl-2/Bax mRNA表達(dá)量比值最高，說(shuō)明此添加劑量細(xì)胞活性最好。Gln對(duì)體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞HsP70 mRNA的表達(dá)有誘導(dǎo)作用，這種作用隨Gln劑量的增加而增加。
　　 二、高溫應(yīng)激條件下谷氨酰胺對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖及HSP70 mRNA表達(dá)的影響
　　 本試驗(yàn)對(duì)乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行37℃、39℃、41℃、43℃四個(gè)不同溫度處理，根據(jù)細(xì)胞應(yīng)激損傷程度篩選出熱應(yīng)激溫度；對(duì)細(xì)胞

4、進(jìn)行0～8 mmol/L不同劑量Gln預(yù)處理，再施加41℃高溫處理，分別檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況及HSP70 mRNA的表達(dá)量。旨在探討不同溫度對(duì)細(xì)胞的損傷情況和在高溫應(yīng)激條件下Gln對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、減緩應(yīng)激損傷的作用，及誘導(dǎo)表達(dá)的HSP70對(duì)細(xì)胞應(yīng)激損傷的作用。結(jié)果表明，以37℃培養(yǎng)條件為對(duì)照組，隨著處理溫度的增加細(xì)胞的凋亡率顯著增加，其中以43℃最顯著，41℃次之，39℃最輕。在41℃條件下，Gln添加劑量為0～0.25 mmol/