胚胎鼠唾液腺上皮細(xì)胞的自組裝研究.pdf

1、目的：在三維培養(yǎng)條件下，觀察胚胎鼠唾液腺上皮細(xì)胞分枝樣結(jié)構(gòu)的形成過程并研究其自組裝機(jī)制，探討唾液腺再生的方法。
　　 方法：（1）獲取15天胚胎SD大鼠下頜下腺行組織塊法培養(yǎng)。分離、純化獲得原代下頜下腺上皮細(xì)胞并傳代培養(yǎng)；對第2代下頜下腺上皮細(xì)胞行CK19，Vimentin，Laminin免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定及透射電鏡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察。（2）將第2代細(xì)胞接種至Matrigel上，進(jìn)行三維培養(yǎng)。共分2組：第一組：實(shí)驗(yàn)組，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)

2、加抗E-cadherin及抗β-catenin。第二組：對照組，單純基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)。在培養(yǎng)第1，3，6，9天內(nèi)倒置顯微鏡下動態(tài)觀察2組三維培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。取培養(yǎng)第6，12天的組織固定，連續(xù)切片后行PAS染色，淀粉酶免疫組化染色，CK19免疫熒光等檢測。E-cadherin，β-catenin的免疫細(xì)胞化學(xué)及激光共聚焦顯微鏡檢測，圖像采集分析MOD值，統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。
　　 結(jié)果：（1）低濃度血清培養(yǎng)可以獲得純化較高的、CK

3、19、Laminin陽性表達(dá)的下頜下腺上皮細(xì)胞。第2代下頜下腺上皮細(xì)胞在透射電鏡下見細(xì)胞核大，胞漿內(nèi)含大量酶原顆粒及豐富的線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。（2）實(shí)驗(yàn)組（即培養(yǎng)基內(nèi)加抗E-cadherin及抗β-catenin）細(xì)胞在Matrigel中呈短的分枝狀生長，分枝數(shù)量少，12天后未見明顯腺泡樣結(jié)構(gòu)形成。對照組下頜下腺細(xì)胞在支架內(nèi)呈分枝狀生長，12天后形成典型的腺泡樣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞間連接緊密。（3）隨機(jī)取培養(yǎng)第6、12天的細(xì)胞固定并

4、連續(xù)切片。實(shí)驗(yàn)組PAS及淀粉酶陽性表達(dá)。而對照組PAS，淀粉酶染色均呈強(qiáng)陽性表達(dá)。（4）培養(yǎng)第12天CK19免疫熒光檢測觀察。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞空間結(jié)構(gòu)無序粗亂，未見明顯的腺泡及管腔結(jié)構(gòu)。對照組細(xì)胞在Matrigel內(nèi)呈網(wǎng)絡(luò)狀生長，形成三維腺泡及管腔結(jié)構(gòu)，空間排列有序。（5）第6天E-cadherin，β-catenin共聚焦顯微鏡觀察。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞膜及胞漿弱熒光表達(dá)。對照組細(xì)胞內(nèi)綠色強(qiáng)熒光主要表達(dá)于細(xì)胞漿。培養(yǎng)第6，12天E-cadherin，