冠心病患者DDAH2啟動子甲基化對內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及機制.pdf

1、研究背景:
　　 諸多危險因素造成的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能失調(diào)被認(rèn)為是動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)發(fā)生發(fā)展的始動環(huán)節(jié)。內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)是一類具有高增殖潛能的前體細(xì)胞。研究表明，EPCs通過動員、遷移、歸巢和分化等步驟參與了受損血管的重新內(nèi)皮化。二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethylargininedimethylaminohydrola

2、se，DDAH2)是一種胞漿蛋白酶，在調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能中起關(guān)鍵作用，并與AS的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，EPCs也表達(dá)DDAH2，而且對EPCs的衰老起重要調(diào)節(jié)作用。然而，AS發(fā)生過程中EPCs中DDAH2的表達(dá)受到何種因素調(diào)節(jié)呢？
　　 研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化是滋養(yǎng)層干細(xì)胞分化過程中調(diào)節(jié)DDAH2表達(dá)的重要方式。研究表明，在內(nèi)皮細(xì)胞，DNA甲基化所引起的DDAH2表達(dá)變化介導(dǎo)了同型半胱氨酸所致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
　　

3、 因此，我們推測EPCs中DDAH2基因啟動子DNA甲基化對其功能起重要調(diào)節(jié)作用，并與AS的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
　　 研究目的:
　　 從冠心病患者和細(xì)胞兩個水平檢測EPCs中DDAH2啟動子DNA甲基化水平，并探討其甲基化水平對EPCs功能的調(diào)節(jié)及具體機制。
　　 研究方法:
　　 (1)探討冠心病患者EPCs中DDAH2啟動子DNA甲基化水平及其與EPCs功能的關(guān)系。密度梯度離心分離25例冠狀動脈造影

4、陽性患者（至少有一支冠狀動脈血管狹窄＞50％。）和15例陰性病人（冠脈造影正常）的外周血單個核細(xì)胞，利用EBM-2細(xì)胞培養(yǎng)基（含EPCs分化所需各種生長因子）進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)單個核細(xì)胞分化成EPCs。通過細(xì)胞黏附纖維蛋白能力檢測EPCs的功能，Real time-qPCR檢測DDAH2 mRNA的表達(dá)，亞硫酸氫鈉測序法檢測DDAH2啟動子DNA甲基化水平。
　　 (2) DDAH2啟動子DNA甲基化介導(dǎo)同型半胱氨酸(Hcy)對EP

5、Cs功能的調(diào)節(jié)及機制。用不同濃度的Hcy(0.3，1.0，3.0mM)孵育EPCs48h，檢測DDAH2基因mRNA表達(dá)水平、啟動子DNA甲基化水平和EPCs功能，并在此基礎(chǔ)上觀察DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza（5μM）對Hcy作用的影響。
　　 研究結(jié)果:
　　 1、冠心病患者EPCs的粘附功能顯著下降，同時伴有DDAH2mRNA表達(dá)水平的下調(diào)。
　　 2、冠心病患者EPCs中DDAH2啟動子呈高甲基化狀態(tài)，

6、且與EPCs的粘附功能呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　 3、1.0mM的Hcy能顯著抑制正常EPCs的粘附功能，同時伴有DDAH2 mRNA表達(dá)的顯著下調(diào)及DDAH2啟動子甲基化水平上調(diào)。
　　 4、Hcy的上述作用能夠被DNA甲基化抑制劑5-Aza(5μM)抑制。研究結(jié)論
　　 冠心病患者外周血EPCs的粘附功能顯著下降，同時伴有DDAH2啟動子高甲基化，兩者顯著負(fù)相關(guān)。Hcy能顯著抑制EPCs的粘附功能，此種作用與其上調(diào)