PRDM2基因啟動(dòng)子甲基化參與肺鱗癌發(fā)病機(jī)制.pdf

1、目的：PRDM2基因是PRDM抑癌基因家族的重要成員，在多種腫瘤中因?yàn)閱?dòng)子甲基化而出現(xiàn)基因表達(dá)降低或缺失。關(guān)于PRDM2與肺癌的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。5-雜氮-2’-脫氧胞苷（5-aza-2dC）是甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，能夠降低基因的甲基化水平。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞，用梯度濃度5-aza-2dC對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長曲線；MSP、RT-PCR及Western-blot方法分別

2、測(cè)定PRDM2基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)、mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　2.22只BAL B/c裸小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組與5-aza-2dC治療組（簡稱治療組），采用皮下注射SK-MES-1細(xì)胞建立移植瘤模型；待移植瘤短徑達(dá)到0.5cm時(shí)，治療組按照1μg/g體重每周3次5-aza-2-dC腹腔注射給藥治療4周，對(duì)照組予以等量5-aza-2-dC溶媒（PBS）每周3次腹腔注射對(duì)照4周，觀察移植瘤生長情況；4周后取出移植瘤，采用MSP法檢測(cè)

3、移植瘤PRDM2基因甲基化狀態(tài)，RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)移植瘤PRDM2基因mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：5-aza-2-dC對(duì)SK-MES-1細(xì)胞具有生長抑制效應(yīng),效用強(qiáng)弱呈現(xiàn)濃度依賴性；SK-MES-1細(xì)胞PRDM2基因啟動(dòng)子處于高度甲基化狀態(tài)，5-aza-2-dC處理能夠濃度依賴性地降低 PRDM2基因啟動(dòng)子的甲基化程度，并濃度依賴性地上調(diào) PRDM2基因mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)水平（0μmol/L

4、5-aza-2-dC組、1μmol/L5-aza-2-dC組、5μmol/L5-aza-2-dC組mRNA表達(dá)水平分別為0.18±0.04、0.32±0.07、0.41±0.09，組間比較p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；蛋白質(zhì)表達(dá)水平分別為0.21±0.05、0.38±0.09、0.62±0.11，組間比較p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。裸鼠荷瘤過程中，治療組移植瘤生長速度慢于對(duì)照組，至荷瘤結(jié)束時(shí)，治療組和對(duì)照組移植瘤的體積分別為（5

5、70±196）mm3和（1499±350）mm3，兩組之間具有顯著性差異（t=7.303,p<0.01）。MSP檢測(cè)結(jié)果顯示：對(duì)照組裸鼠移植瘤PRDM2基因啟動(dòng)子甲基化頻率為81.8％，治療組裸鼠移植瘤PRDM2基因啟動(dòng)子甲基化頻率為27.3%。對(duì)照組和治療組PRDM2mRNA分別為0.1703±0.1201和0.5322±0.090，蛋白質(zhì)表達(dá)水平分別為0.1451±0.1012和0.5125±0.4902,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.