LITAF基因表達(dá)與胰腺癌發(fā)病的相關(guān)性及啟動子甲基化調(diào)節(jié)表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、胰腺癌是一種進(jìn)展較快，死亡率較高的惡性腫瘤，其5年生存率小于5％。而導(dǎo)致其預(yù)后較差的主要原因是缺乏有效的可用于胰腺癌早起診斷的腫瘤標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)。因此，探究關(guān)于胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制是非常必要。這些年以來，很多研究顯示，在不少腫瘤中 LITAF基因能夠?qū)δ[瘤產(chǎn)生明顯的抑制效果，但 LITAF基因在胰腺癌中的作用則少有報(bào)道。
　　本次研究的目的旨在探究LITAF基因在胰腺癌中的生物學(xué)功能，及其表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制。在研究中，首先

2、收集了用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的50例胰腺癌病例的標(biāo)本，這其中包括25例配對新鮮組織樣本并含有相應(yīng)的石蠟包埋組織樣本，另外25例則僅有石蠟包埋的組織樣本。以及用于體外實(shí)驗(yàn)的4株胰腺癌細(xì)胞株（分別為BxPC-3，AsPC-1，CFPAC-1和PANC-1）。我們利用亞硫酸氫鹽測序法（BSP）以及甲基化特異性PCR技術(shù)（MSP）對LITAF基因啟動子片段的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測。該啟動子片段位于LITAF基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近的5’非轉(zhuǎn)錄區(qū)（Genbank

3、accession: NC018927 Region:11680019-11680258），包含240個堿基、16個CpG位點(diǎn)。此外，用免疫組織化學(xué)染色。MTT試驗(yàn)，流式細(xì)胞儀等方法分別檢測了胰腺癌細(xì)胞中LITAF蛋白的表達(dá)，細(xì)胞增值，凋亡及細(xì)胞周期的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在25例新鮮的配對組織樣本中，腫瘤組織LITAF mRNA的表達(dá)顯著低于癌旁正常組織。在胰腺癌組織中，LITAF蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)出高、低兩種不同的水平，LITAF蛋白低表達(dá)病例

4、的無病生存期顯著下降，但總體生存期沒有明顯的差異。在對LITAF基因啟動子進(jìn)行甲基化狀態(tài)分析后發(fā)現(xiàn)，LITAF基因的低表達(dá)與其啟動子的高甲基化狀態(tài)有關(guān)，且LITAF基因的表達(dá)可以被去甲基化藥物所調(diào)節(jié)并呈現(xiàn)劑量依賴。同時，在胰腺癌細(xì)胞株中對LITAF基因啟動子去甲基化處理后，抑制了胰腺癌細(xì)胞的增值，促使其發(fā)生凋亡及細(xì)胞周期阻滯。綜上，LITAF基因或許是一個潛在的抑癌基因，并有可能作為胰腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)，而該基因的表達(dá)受其啟動子異常高甲