基因甲基化對肺鱗癌PRDM5表達(dá)的影響研究.pdf

1、【目的】
　　研究肺鱗癌組織及癌旁組織中PRDM5基因甲基化狀況及基因表達(dá)水平，分析二者之間關(guān)系并通過移植瘤實(shí)驗(yàn)初步探討去甲基化治療在肺鱗癌治療中的潛在可行性。
　　【方法】
　　1.收集30例肺鱗癌患者的肺組織標(biāo)本，每例患者分別留取肺癌組織、癌旁組織（距離癌灶小于2厘米）和遠(yuǎn)處肺組織（距離癌灶大于4厘米）標(biāo)本。利用MSP、RT-PCR、Western-blot檢測PRDM家族基因的甲基化狀態(tài)及基因表達(dá)水平；
　

2、　2.體外培養(yǎng)肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞系，用不同濃度的5-aza-2dC對SK-MES-1細(xì)胞系進(jìn)行去甲基化處理,采用MTT法檢測細(xì)胞生長變化；
　　3.建立肺鱗癌SK-MES-1裸鼠皮下移植瘤模型：23只裸鼠，采用皮下注射法，在裸鼠腋后側(cè)注射SK-MES-1細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)期間觀察裸鼠一般情況，游標(biāo)卡尺測量腫瘤的最大縱徑及最大橫徑，待腫瘤短徑達(dá)0.5cm左右，隨機(jī)將裸鼠分成治療組和非治療組，治療組腹腔注入去甲基化藥物5-雜氮-2’脫

3、氧胞苷進(jìn)行藥物干預(yù)（按1ug/g體重給藥），非治療組腹腔注入等量PBS，每周注射3次，干預(yù)28天后，處死裸鼠，剝離腫瘤組織，稱瘤重，計(jì)算抑瘤率，計(jì)算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線圖。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法，Wester-blot，MSP分別測定各組裸鼠移植瘤PRDM5的mRNA和蛋白表達(dá)水平及甲基化狀態(tài)研究。
　　【結(jié)果】
　　1.與遠(yuǎn)處組織相比，在肺鱗癌組織中PRDM5基因甲基化陽性率為(73.3％)，癌旁組織中

4、甲基化陽性率為(46.7%)，遠(yuǎn)處組織甲基化陽性率為(16.7%)(P<0.05)，PRDM5基因在癌組織中出現(xiàn)高頻甲基化，導(dǎo)致 PRDM5基因蛋白和mRNA表達(dá)下調(diào)或缺失。
　　2.PRDM5在肺鱗癌組織中低表達(dá)，在癌旁組織中表達(dá)高于肺鱗癌組織，在遠(yuǎn)處組織中表達(dá)水平最高(P<0.05)，PRDM5的表達(dá)與肺鱗癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、吸煙、臨床分期無明顯相關(guān)(P＞0.05)。
　　3.5-a

5、za-2dC對SK-MES-1細(xì)胞系生長具有抑制作用，隨藥物濃度增加其抑制作用增強(qiáng)。
　　4.治療組的裸鼠移植瘤生長緩慢，治療組腫瘤體積為(570.63±196.97)mm3腫瘤重量為(0.785±0.368)g,明顯小于非治療組(1499.09±350.45)mm3瘤重(2.045±0.605)g(P＜0.05)，治療組腫瘤抑瘤率為57.79%，MSP結(jié)果顯示非治療組甲基化陽性率72.3%，治療組甲基化陽性率27.3%。West

6、er-blot和RT-PCR顯示治療組各腫瘤組織中PRDM5的蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào)，非治療組PRDM5蛋白和mRNA表達(dá)缺失或減弱。治療組表達(dá)水平明顯高于對照組(P＜0.05),治療組通過注射去甲基化藥物(5-aza-2dC)處理能逆轉(zhuǎn)PRDM5基因甲基化狀態(tài)，并上調(diào)基因的表達(dá)水平。
　　【結(jié)論】
　　1.肺鱗癌組織中存在PRDM5的低表達(dá)，其表達(dá)水平降低與基因甲基化有關(guān)；2.去甲基化治療能夠抑制腫瘤細(xì)胞系的生長，并對肺鱗