甲胎蛋白基因甲基化模式對(duì)基因表達(dá)的影響.pdf

1、No20032265河弦蓮斜六孝碩士研究生畢業(yè)論文甲胎蛋白基因甲基化模式對(duì)基因表達(dá)的影響研究生導(dǎo)師專業(yè)二級(jí)學(xué)院研究起止日期提交日期王瑋呼文亮教授生物化學(xué)與分子生物學(xué)天津武警醫(yī)學(xué)院2004年9月一2006年3月2006年3月中文摘要5甲基化特異性PCR(MSP)方法檢測(cè)AFP基因兩區(qū)域在不同細(xì)胞中甲基化修飾密度：使用MSP引物(包括甲基化引物及非甲基化引物)擴(kuò)增MoDNA模板，電泳對(duì)比MSP產(chǎn)物。6Bisulfite測(cè)序PCR(BSP)方

2、法確定AFP基因兩區(qū)域在不同細(xì)胞中甲基化修飾位點(diǎn)：使用BSP引物擴(kuò)增MoDNA模板，電泳核對(duì)產(chǎn)物長(zhǎng)度后，回收純化PCR產(chǎn)物，自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序，對(duì)比甲基化修飾位點(diǎn)。結(jié)果：1細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：肝癌細(xì)胞大小不等，排列紊亂，核漿比例倒置，失去正常的接觸抑制，鋪滿瓶底后有重疊現(xiàn)象，具有無限增殖能力；正常人成纖維細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞生長(zhǎng)排列為漩渦狀。2RNA的提?。翰扇∪コ衙肝廴镜拇胧┎⑹褂肈NA酶純化處理RNA，以防止RNA發(fā)生降解或含有DNA雜帶，

3、選取符合以下條件樣品：OD260／28018，甲醛變性膠電泳可見三條帶：28s、18s、5s。3RTPCR結(jié)果：電泳可見HepG2細(xì)胞451bp處及350bp處各有一清晰的特異性條帶；SMMC7721細(xì)胞451bp處有一模糊的特異性條帶，350bp處有一清晰的特異性條帶；而對(duì)照人成纖維細(xì)胞只在350bp處有一清晰的特異性條帶。片段長(zhǎng)度與原設(shè)計(jì)長(zhǎng)度一致。以p—actin作為內(nèi)參照，凝膠圖像分析軟件讀取分析二維圖像顯示，HepG2中AFP表