miR-495基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的PRL-3基因表達(dá)影響研究.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：416523212193南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文miR495基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的PRL3基因基因表達(dá)影響研究表達(dá)影響研究miR495genepromotermethylationonPRL3expressioningastriccancercell張國陽張國陽培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：揭志剛教授主任醫(yī)師申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱

2、：外科學(xué)（普外）論文答辯日期：2015年5月答辯委員會(huì)主席：朱培謙評(píng)閱人：孫明生曾慶黎2015年5月摘要II摘要目的：目的：探討在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL3的內(nèi)源性micrNA分子miR495基因上游CpG島甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的PRL3基因表達(dá)影響。方法：方法：培養(yǎng)2株正常胃黏膜上皮細(xì)胞系（GES1和HFE145）和4株轉(zhuǎn)移潛能不同的胃癌細(xì)胞系（MKN28SGC7901MKN45BGC823），用WesternBlot方法檢測(cè)細(xì)胞

3、中PRL3蛋白水平，用qRTPCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中miR495表達(dá)情況，通過甲基化特異性PCR（MSP）及亞硫酸氫鈉測(cè)序法(bisulfitegenomicsequencing，BSP)檢測(cè)miR495基因啟動(dòng)子甲基化水平，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4種腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力。利用不同濃度（0uM、1uM、5uM、10uM）的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5氮雜胞苷2’脫氧胞苷(5aza2’dc)處理后，37℃、5%CO2的孵箱繼續(xù)孵育48小

4、時(shí)，同樣利用以上方法測(cè)定PRL3蛋白水平、miR495表達(dá)情況、miR495基因啟動(dòng)子甲基化水平以及腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的變化。結(jié)果：結(jié)果：胃癌細(xì)胞在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5氮雜胞苷2’脫氧胞苷去甲基化處理后，miR495表達(dá)均明顯增加，且明顯抑制了PRL3蛋白及mRNA的表達(dá)，Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)表明，胃癌細(xì)胞在去甲基化處理后，侵襲和遷移能力均明顯下降。結(jié)論：結(jié)論：在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL3的內(nèi)源性micrNA分