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1、目的:在胃癌中預(yù)測(cè)并驗(yàn)證可能調(diào)控腹膜轉(zhuǎn)移相關(guān)基因PRL-3表達(dá)的microRNA(miRNA)分子。
方法:通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù),運(yùn)用4個(gè)miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件,結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),選取9條高度可能靶向PRL-3的miRNA分子,用qRT-PCR方法在胃癌組織和胃癌細(xì)胞系SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823及正常胃黏膜組織和胃黏膜上皮細(xì)胞系GES-1、HFE-145中檢測(cè)這9條miRNA分子表達(dá)情況,得出兩條在胃
2、癌組織及胃癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)最明顯的miRNA分子(miRNA-551a、miRNA-495),設(shè)計(jì)并合成這2種miRNA分子化學(xué)合成類(lèi)似物miRNA mimics,分別用Lipofectamine2000TM脂質(zhì)體將miRNA mimics瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到SGC7901、MKN28細(xì)胞,設(shè)立空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組,用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染24小時(shí)后PRL-3mRNA的表達(dá)情況,用Western Blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中PRL-3蛋白水
3、平變化。Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SGC7901、MKN28細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力變化。
結(jié)果:胃癌細(xì)胞SGC7901和MKN28在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-495/miR-551a mimics后,均明顯抑制了PRL-3蛋白及mRNA的表達(dá),tranwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)表明,在轉(zhuǎn)染miR-495/miR-551a mimics后,胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力均明顯下降。
結(jié)論:miRNA-551a、miRNA-49
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