冠心病與血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白基因啟動(dòng)子甲基化關(guān)系的初步研究.pdf

1、背景：血栓調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin，TM）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的糖蛋白，作為凝血酶的受體，它參與蛋白C（PC）的活化，在抗凝過(guò)程中發(fā)揮重要作用，此外，它還能降解纖溶酶原激活物抑制物（PAI），促進(jìn)纖溶。內(nèi)皮功能受損是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因素，內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝功能改變可導(dǎo)致抗凝/纖溶平衡失調(diào)。TM 通過(guò)結(jié)合凝血酶，可以對(duì)抗由其損傷內(nèi)皮引起的促動(dòng)脈粥樣硬化（AS）作用。因此，作為內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)因子之一，且具有抗血

2、栓形成功能的TM 在AS 中的作用令人關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者血漿中TM 濃度顯著高于對(duì)照組，表明TM 的表達(dá)調(diào)控在其參與動(dòng)脈粥樣硬化病理生理作用的機(jī)制中有重要意義。 近年來(lái)，AS 的表遺傳學(xué)研究逐漸成為熱點(diǎn)，甲基化作為一種主要的表遺傳學(xué)修飾，是最常見(jiàn)的復(fù)制后及轉(zhuǎn)錄前修飾方式之一，在基因表達(dá)調(diào)控、發(fā)育調(diào)節(jié)、基因組印跡等方面發(fā)揮重要作用。許多研究證明，動(dòng)脈粥樣硬化與特異基因的異常甲基化有關(guān)，與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)的TM

3、 基因其啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度在病理情況下顯著升高。因此對(duì)體內(nèi)TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病中的研究及對(duì)其表達(dá)調(diào)控機(jī)理的探討，將有助于進(jìn)一步探討動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理，從而為冠心病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。 目的：（1）檢測(cè)冠心病患者血漿TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)并與正常人對(duì)比，觀察人TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)是否與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生相關(guān)；（2）檢測(cè)研究對(duì)象的血漿TM 濃度，通過(guò)觀察血漿TM 濃度與人TM

4、 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的關(guān)系，探討TM 基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)理。（3）通過(guò)觀察血漿TM 濃度與冠心病發(fā)生的關(guān)系，進(jìn)一步推測(cè)TM 基因參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的機(jī)理。 方法：（1）隨機(jī)選取90 例經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影（CAG）證實(shí)狹窄或有粥樣斑塊的患者，和75 例經(jīng)CAG 證實(shí)無(wú)狹窄的對(duì)照組，采用甲基化特異性PCR(MS-PCR)檢測(cè)兩組血漿TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況。（2）ELISA 法檢測(cè)兩組血漿TM 濃度，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

5、 結(jié)果：（1）MS-PCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，冠心病患者90 例，甲基化檢出率為41％（37/90）；對(duì)照組60 例，甲基化檢出率20％（17/75），冠心病組TM 基因啟動(dòng)子甲基化檢出率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。 （2）性別與TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)關(guān)系分析：冠心病組男性患者76 例，甲基化檢出率為43％（33/76），對(duì)照組男性患者43 例，甲基化檢出率為19％（8/43），兩者比較冠心病組男性患者甲基化檢出率明顯高于對(duì)照

6、組（P＜0.05）；冠心病組女性患者14 例，甲基化檢出率為29％（4/14），對(duì)照組女性患者32 例，甲基化檢出率為22％（7/32），兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 （3）動(dòng)脈粥樣硬化不同血管病變程度與TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)關(guān)系分析：1 支血管病變組甲基化檢出率為44％（11/25），2 支血管病變組檢出率為39％（9/23），3支血管病變組甲基化檢出率為40％（17/42），3 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0

7、.05）。因此，TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與血管病變程度無(wú)關(guān)。 （4）按年齡將所有對(duì)象分為4 組，49 歲以下組31 例，甲基化檢出率19.35％；50～59 歲組48 例，甲基化檢出率29.17％；60～69 歲51 例，甲基化檢出率33.33％； 70 歲以上組35 例，甲基化檢出率42.86％。隨年齡的增加，TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢出率有上升的趨勢(shì)，但4 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 （5）冠心病組

8、血漿TM 濃度為(0.70±0.24)ng/ml，對(duì)照組為(0.52±0.18)ng/ml，冠心病組高于對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 （6）性別與血漿TM 濃度關(guān)系的分析：冠心病組男性患者35 例，血漿平均TM 濃度為7.0±2.4ng/ml，對(duì)照組男性26 例，血漿平均TM 濃度為5.2±1.8ng/ml，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，冠心病組男性血漿平均TM 濃度顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；冠心病組女性

9、患者6 例，血漿平均TM 濃度為6.1±2.4ng/ml，對(duì)照組女性15 例，血漿平均TM 濃度為5.6±2.2ng/ml，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論：（1）165 例研究對(duì)象中，冠心病組的TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢出率明顯高于對(duì)照組，由此推測(cè)外周血TM 基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化狀態(tài)，與冠心病的發(fā)生密切相關(guān)。它抑制或下調(diào)TM 的表達(dá)，使其失去對(duì)抗由其損傷內(nèi)皮引起的促動(dòng)脈粥樣硬化（AS）作用，產(chǎn)生促動(dòng)脈粥樣硬化

10、作用。（2）冠心病組男性TM 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢出率顯著高于對(duì)照組，而女性未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，提示外周血TM 基因高甲基化狀態(tài)在男性易患AS 中發(fā)揮重要作用，其機(jī)制可能與雄性激素相關(guān)，但需進(jìn)一步研究證實(shí)。（3）90 例冠心病患者中，未觀察到TM 基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)隨病變程度的增加有增高的趨勢(shì)，這提示外周血TM 基因的高甲基化狀態(tài)參與啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化，之后TM 甲基化呈維持狀態(tài)。（4）冠心病組血漿TM 濃度顯著高于對(duì)照組，提示血細(xì)胞生成