選擇性阻斷抑制性受體表位對(duì)NK-92細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、目的：研究選擇性阻斷NK-92細(xì)胞抑制性受體表位對(duì)其殺傷白血病細(xì)胞及白血病干細(xì)胞(leukemia stem cells，LSCs)活性的影響，探討NK-92細(xì)胞受體與配體之間的相容性對(duì)NK-92細(xì)胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)理。
　　 方法：⑴以NK-92細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，K562細(xì)胞株及白血病細(xì)胞為靶細(xì)胞。應(yīng)用單克隆抗體CD85j和CD158d封閉處理NK-92細(xì)胞后，與K562細(xì)胞株及急性白血病(acute leukemia，

2、AL)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞按5∶1、10∶1、20∶1的效靶比混合孵育，采用CFSE/PI雙染的方法，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)封閉前后NK-92細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞體外殺傷活性的變化。⑵以CD34+CD38-CD123+作為L(zhǎng)SCs的免疫表型，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)急性白血病患者白血病細(xì)胞中是否存在此免疫表型的細(xì)胞;單克隆抗體CD85j和CD158d封閉處理NK-92細(xì)胞后，與存在CD34+CD38-CD123+免疫表型的骨髓單個(gè)核細(xì)胞按10∶1、20∶1、4

3、0∶1的效靶比混合孵育，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)獲取殺傷前后每1×105個(gè)靶細(xì)胞中LSCs數(shù)量的變化。
　　 結(jié)果：①NK-92細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞有殺傷活性，且隨效靶比增大而增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但相同效靶比時(shí)，NK-92細(xì)胞的殺傷活性在受體封閉前后之間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②NK-92細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞殺傷作用隨著效靶比的增高逐漸增強(qiáng)，當(dāng)效靶比為5∶1、10∶1、20∶1時(shí)分別為（12.7±1.10）％

4、、（19.96±2.04）％、（22.2±1.70）％，各效靶比之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)單克隆抗體CD85j和CD158d封閉后，效靶比為5∶1、10∶1、20∶1時(shí)分別為（12.8±1.12）％、（20.39±1.44）％、（23.01±1.50）％，各效靶比之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而相同效靶比時(shí)，受體封閉前后之間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);封閉NK-92細(xì)胞的KIR2DL4、ILT

5、2受體表位，不能提高其對(duì)白血病細(xì)胞的殺傷活性。③NK-92細(xì)胞對(duì)LSCs的殺傷試驗(yàn)中，各實(shí)驗(yàn)組中LSCs的數(shù)量并未隨著效靶比的增高而降低(P＞0.05)，各效靶比實(shí)驗(yàn)組在NK-92受體表位封閉前及封閉后與空白組比較，LSCs數(shù)量也未顯著降低(P＞0.05)。在其中1例急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者的體外殺傷試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在不同效靶比時(shí)LSCs的數(shù)量均顯著低于空白組:在空白對(duì)照組中

6、，LSCs的數(shù)量為2960個(gè)，效靶比為10∶1實(shí)驗(yàn)組LSCs數(shù)量降低至1422個(gè)，效靶比為20∶1實(shí)驗(yàn)組LSCs數(shù)量進(jìn)一步下降至1180個(gè);而效靶比增加至40∶1時(shí)LSCs數(shù)量沒(méi)有明顯下降。
　　 結(jié)論：⑴NK-92細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的殺傷作用隨著效靶比的增高而增高。⑵封閉NK-92細(xì)胞表面的KIR2DL4、ILT2受體表位，不能顯著增強(qiáng)其對(duì)白血病細(xì)胞及LSCs的體外殺傷能力。⑶NK-92細(xì)胞對(duì)部分AL患者的LSCs有殺傷作用，而