重組鈣網蛋白39-272片段誘導CD1dhiCD5+B細胞分化為抗體分泌細胞的研究.pdf

1、鈣網蛋白（Calreticulin，CRT）是內質網腔中高度保守的糖蛋白質，能夠發(fā)揮調節(jié)細胞內Ca2+穩(wěn)態(tài)、協(xié)助新合成的蛋白質正確折疊、參與MHCI類分子復合物的組裝等功能。此外，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，CRT還能夠出現(xiàn)在細胞膜表面和細胞外微環(huán)境中，參與凋亡細胞清除以及抗腫瘤免疫等過程。在自身免疫病患者體液中出現(xiàn)可溶性CRT還提示其可能參與自身免疫病的發(fā)生與發(fā)展。
　　我們前期的研究工作發(fā)現(xiàn)，原核重組表達的小鼠CRT片段39-272（

2、rCRT/39-272）具有超強的免疫生物學活性，能刺激小鼠腹腔巨噬細胞產生NO和TNF-α，還能刺激B細胞增殖，分泌IL-6、IL-10等細胞因子；并且能誘導B細胞發(fā)生抗體類別轉換。最近的研究結果表明，rCRT/39-272可以活化具有免疫調節(jié)功能的可分泌IL-10的CD1dhiCD5+B細胞（B10細胞），通過IL-10依賴的方式抑制T細胞介導的免疫應答。腹腔注射rCRT/39-272或者過繼轉移rCRT/39-272活化的B10細

3、胞能夠抑制小鼠實驗型自身反應性腦脊髓炎（EAE）的發(fā)病。近期的研究發(fā)現(xiàn)，除了IL-10依賴的途徑之外，B10細胞還可以通過分泌抗體的方式來抑制T細胞應答。
　　在我們前期已取得的進展的基礎上，本課題重點研究rCRT/39-272誘導CD1dhiCD5+B細胞分化為抗體分泌細胞（antibody-secreting cells，ASCs）的作用。B細胞經rCRT/39-272刺激后，ASCs的比例明顯升高，并且促進ASCs分化的轉錄

4、因子blimp1，xbp1，irf4和 il-10的表達水平顯著增強，而抑制ASCs分化的轉錄因子pax5和bcl6的表達水平則顯著下調。腹腔注射rCRT/39-272的小鼠脾臟中具有ASCs表型的細胞比例明顯升高。通過細胞表面染色的方法我們確定了rCRT/39-272誘導的ASCs的表型是CD1dhiCD5+，與調節(jié)性B10細胞的表型一致。rCRT/39-272能夠在體外刺激CD1dhiCD5+ B細胞表達與ASCs分化相關的轉錄因子

5、，并且可以分泌泛特異性、自身反應性的IgM抗體。經rCRT/39-272免疫的小鼠脾臟CD1dhiCD5+B細胞能分化為分泌特異性IgM抗體的ASCs。
　　腹腔注射rCRT/39-272能夠降低小鼠EAE的病情嚴重性，并且在此EAE小鼠脾臟中可以檢測到ASCs比例顯著升高。表型分析證實這些ASCs來源于CD1dhiCD5+B細胞，提示rCRT/39-272在體內激活了調節(jié)性B10細胞，并誘導其分化為ASCs，可能通過抗體依賴的方