全反式維甲酸與豬膽酸鈉抗白血病協(xié)同作用研究.pdf

1、目的:全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)用于治療急性早幼粒細胞白血病,使其從一種預(yù)后兇險的急性白血病成為預(yù)后相對較好的急性白血病。但隨著ATRA廣泛應(yīng)用,其腫瘤耐藥及副反應(yīng)問題逐漸顯露,如何克服ATRA耐藥是目前的研究熱點,本課題研究全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)與豬膽酸鈉(SBA-Na)對人白血病K562及Kasumi-1細胞系的抗白血病作用及兩藥協(xié)同作用

2、情況并探討其作用機制。
　　方法:分別配制濃度為10-6mol/L(W1)、10-4mol/L(W2)的ATRA溶液及濃度為100μg/ml(Z1)、200μg/ml(Z2)的SBA-Na溶液,分別使用W1、W2、Z1、Z2、W1+Z1、W2+Z2各組藥物處理增殖期的2種細胞系,并設(shè)立不加藥的空白對照組。鏡下觀察不同處理組細胞形態(tài)及生長情況;應(yīng)用CCK-8法檢測細胞增殖能力,繪制細胞生長抑制曲線;分別采用PI染色法和PI/Anne

3、xin V雙染法,使用流式細胞檢測術(shù)檢測2種細胞各加藥組細胞周期及凋亡的變化;采用實時熒光定量PCR(RTq PCR)法檢測K562細胞各組Cyclin A及Kasumi-1細胞系各組AML1-ETO基因表達量的變化;采用免疫印跡法(Western blotting)檢測K562細胞系各組Cyclin D1蛋白表達量的變化。
　　結(jié)果:ATRA及SBA-Na對2種細胞均有增殖抑制作用,聯(lián)合用藥作用更明顯;各處理組與對照組相比,細胞

4、周期分布發(fā)生明顯變化,處理組細胞凋亡明顯增加,尤以ATRA聯(lián)合SBA-Na處理組凋亡最為明顯。K562細胞系各處理組與對照組相比,Cyclin A基因表達發(fā)生明顯變化,各處理組Cyclin A表達水平由低到高依次為W2、W2+Z2、W1+Z1、Z2、W1、K、Z1;Kasumi-1細胞系各處理組與對照組相比,AML1-ETO基因表達發(fā)生明顯變化,空白對照及各處理組AML1-ETO基因表達由低到高依次為:W2、W2+Z2、Z2、W1、W1

5、+Z1、K、Z1;K562細胞系各處理組與對照組相比,各處理組Cyclin D1蛋白表達由低到高依次為:W2+Z2、Z2、W1+Z1、W2、K、W1、Z1。
　　結(jié)論:ATRA及SBA-Na均可抑制K562及Kasumi-1細胞增殖,促進其凋亡,且SBA-Na可減少ATRA用量,二者聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用。ATRA對K562及Kasumi-1細胞生物活性抑制作用的潛在機制為抑制細胞周期蛋白及AML1-ETO基因表達;SBA-Na對K5