中國8省非結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的菌種鑒定.pdf

1、目的：初步了解中國非結(jié)核分枝桿菌（nontuberculosis mycobacterium，NTM）的種類，為非結(jié)核分枝桿菌病的臨床診斷、治療和預(yù)防提供重要依據(jù)；評(píng)價(jià)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP，PRA）和基因測序等方法在NTM鑒定中的作用。
　　方法：
　　1.2005年~2012年8年間收集來自中國8?。ò不铡⒏＝?、甘肅、湖南、江西、內(nèi)蒙古、四川和新疆）的省級(jí)結(jié)核病防治所/結(jié)核病院使用對(duì)硝

2、基苯甲酸（PNB）/噻吩-2-羧酸肼（TCH）鑒別培養(yǎng)基的方法初步鑒定出的610株非結(jié)核分枝桿菌臨床分離株，常規(guī)培養(yǎng)、保存。
　　2.同時(shí)使用PNB/TCH鑒別培養(yǎng)和多位點(diǎn)PCR方法進(jìn)一步進(jìn)行分枝桿菌菌種鑒定。
　　3.采用基于hsp65和rpoB基因的PRA方法將以確定的非結(jié)核分枝桿菌鑒定至種/亞種。對(duì)PRA方法不能鑒定出種/亞種者，采用多基因（包括rpoB、hsp65、ITS、gnd、glpK、secA和sodA）測序分

3、析完成鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.共收集到初步鑒定為NTM的臨床分離菌株610株，經(jīng)本研究使用PNB/TCH鑒別培養(yǎng)和多位點(diǎn)PCR方法鑒定為53株為結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB），其他557株可能為非結(jié)核分枝桿菌。
　　2.使用PRA和測序方法對(duì)這557株進(jìn)一步鑒定后，發(fā)現(xiàn)了4株為支氣管戈登菌（Gordonia bronchialis），46株鼻疽諾卡菌（Nocardia

4、farcinica）；和507株非結(jié)核分枝桿菌。其中非結(jié)核分枝桿菌共有28種，分別為：66株膿腫分枝桿菌（M. abscessus），106株鳥分枝桿菌（M. avium），17株龜分枝桿菌（M. chelonae），3株哥倫比亞分枝桿菌（M. colombiense），12株偶發(fā)分枝桿菌（M. fortuitum），1株日內(nèi)瓦分枝桿菌（M. genavense），34株戈登分枝桿菌（M. gordonae），1株荷斯坦分枝桿菌（M.

5、holsaticum），209株胞內(nèi)分枝桿菌（M. intracellulare），3株堪薩斯分枝桿菌（M. kansasii），2株熊本分枝桿菌（M. kumamotonense），6株緩黃分枝桿菌（M. lentiflavum），1株馬提尼分枝桿菌（M. mantenii），5株馬賽分枝桿菌（M. marseillense），24株馬西利亞分枝桿菌（M. massiliense），1株摩納哥分枝桿菌（M. monacense），2株

6、新金黃分枝桿菌（M. neoaurum），3株副瘰疬分枝桿菌（M. parascrofulaceum），1株福西亞分枝桿菌（M. phocaicum），2株薩斯喀徹溫分枝桿菌（M. saskatchewanense），1株塞內(nèi)加爾分枝桿菌（M. senegalense），2株首爾分枝桿菌（M. seoulense），2株膿毒分枝桿菌（M. septicum），1株賽特分枝桿菌（M. setense），2株下出分枝桿菌（M. shimoi

7、dei），1株M. stomatepiae，3株蘇爾加分枝桿菌（M. szulgai）和2株三重分枝桿菌（M. triplex）。
　　3.507株非結(jié)核分枝桿菌中，按菌株數(shù)量統(tǒng)計(jì)，前9位分別為胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、戈登分枝桿菌、馬西利亞分枝桿菌、龜分枝桿菌、偶發(fā)分枝桿菌、緩黃分枝桿菌和馬賽分枝桿菌。
　　結(jié)論：
　　1.共鑒定出28種非結(jié)核分枝桿菌，其中M. marseillense， M. sas

8、katchewanense，M. seoulense，M. kumamotonense，M. stomatepiae，M. mantenii和Gordonia bronchialis6種為國內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)。證實(shí)在中國具有致病性的非結(jié)核分枝桿菌種類繁多。
　　2. PRA-rpoB（內(nèi)切酶MspI和HaeIII）和PRA-hsp65（內(nèi)切酶BstPI和HaeIII）方法具有良好的分枝桿菌菌種鑒定效果。
　　3.聯(lián)合應(yīng)多位點(diǎn) PCR