腎包膜下移植及轉(zhuǎn)錄因子Cdx2對內(nèi)耳毛細(xì)胞分化或再生的研究.pdf

1、本文利用不同時期內(nèi)耳細(xì)胞和組織進(jìn)行以下兩部分研究：
　?。ㄒ唬┡咛テ趦?nèi)耳單細(xì)胞在腎包膜下自發(fā)性組合成內(nèi)耳上皮樣結(jié)構(gòu)的研究
　　微環(huán)境、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用在胚胎發(fā)育中扮演著重要的角色，對干細(xì)胞干性的維持和分化是不可或缺的。內(nèi)耳感覺上皮包含支持細(xì)胞和毛細(xì)胞，這些細(xì)胞由胚胎早期聽泡中的干細(xì)胞分化而來。然而，胚胎內(nèi)耳組織的微環(huán)境、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用是否可以調(diào)節(jié)干細(xì)胞的增殖和分化，是否能夠自發(fā)性的組合成內(nèi)耳感覺上皮仍不得而

2、知。本研究采用酶消化法分離出胚胎13.5天內(nèi)耳組織中所有的單細(xì)胞，移植于腎包膜下，發(fā)現(xiàn)這些游離的細(xì)胞最早能夠在移植7天后重新聚集形成感覺上皮樣結(jié)構(gòu)，至移植后25天，可以形成更成熟的內(nèi)耳感覺上皮。同時，細(xì)胞類型特有的標(biāo)志物的免疫熒光染色顯示不僅形成了毛細(xì)胞和支持細(xì)胞，而且毛細(xì)胞有規(guī)則的排列在支持細(xì)胞的上面一層。這些研究進(jìn)一步顯示胚胎期內(nèi)耳組織中的微環(huán)境、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用有自主的信號通路能夠誘導(dǎo)感覺上皮結(jié)構(gòu)的形成。本研究為干細(xì)胞分化

3、成毛細(xì)胞的體內(nèi)研究提供了可以借鑒的系統(tǒng)。
　　(二)異位表達(dá)Cdx2對內(nèi)耳毛細(xì)胞再生的作用
　　耳蝸毛細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，能夠?qū)㈦姶碳まD(zhuǎn)化為電信號，傳導(dǎo)到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生聽力。哺乳動物的耳蝸毛細(xì)胞易受感染、耳毒性藥物、噪音、基因突變等影響，再生能力很弱。目前，對毛細(xì)胞再生的基礎(chǔ)研究主要集中在干細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)分化方面。
　　然而，我們發(fā)現(xiàn)尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子Cdx2在胃腸上皮化生中發(fā)揮重要作用。正常情況下，Cdx2局限表達(dá)

4、在十二指腸、結(jié)腸和直腸，可以作為病理診斷中的特異性標(biāo)記物。當(dāng)發(fā)生胃腸上皮化生時，胃部會有腸型上皮的表達(dá)，會出現(xiàn)Cdx2的表達(dá)，同時會引起Math1的過表達(dá)和Sox2的表達(dá)量降低。而Math1和Sox2的表達(dá)量對內(nèi)耳毛細(xì)胞的再生和分化起著相當(dāng)重要的作用。
　　因此，我們目前工作重點放在異位表達(dá)Cdx2對內(nèi)耳毛細(xì)胞再生及其潛在機制的研究。通過Cdx2腺病毒感染和質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染耳蝸上皮兩種方法來研究.目前我們發(fā)現(xiàn)，腺病毒感染耳蝸上皮組織7天