鎘誘導(dǎo)豬腎近曲小管上皮細(xì)胞（LLC-PK-,1-）凋亡及其機(jī)理的研究.pdf

1、該課題以豬腎近曲小管上皮細(xì)胞LLC-PK<,1>為對(duì)象,擬探討鎘誘導(dǎo)LLC-PK<,1>細(xì)胞凋亡及其機(jī)制,為進(jìn)一步研究鎘對(duì)腎毒性的機(jī)制提供科學(xué)依據(jù).第一部分有、無(wú)血清對(duì)鎘抑制LLC-PK<,1>細(xì)胞增殖的影響用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法比較有、無(wú)小牛血清細(xì)胞存活率,Image-Pro Plus軟件系統(tǒng)拍攝有、無(wú)血清細(xì)胞光學(xué)形態(tài)變化.結(jié)果發(fā)現(xiàn):相同濃度CdCl<,2>作用8h、12h后,有血清條件下的細(xì)胞存活率明顯高于無(wú)血清條件下的存

2、活率.無(wú)血清條件下,40μmol/LCdCl<,2>作用LLC-PK<,1>細(xì)胞12h,視野下幾乎全部為懸浮細(xì)胞;在有血清的條件下,40μmol/LCdCl<,2>作用12h,僅部分細(xì)胞懸浮,大多仍為正常貼壁細(xì)胞.在相同鎘濃度作用下,光鏡觀察顯示,無(wú)血清條件下的細(xì)胞損傷較有血清條件下嚴(yán)重.第二部分鎘誘導(dǎo)LLC-PK<,1>細(xì)胞凋亡的研究MTT比色法檢測(cè)CdCl<,2>對(duì)細(xì)胞的毒性效應(yīng);用透射電鏡觀察細(xì)胞核結(jié)構(gòu)、瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞儀

3、測(cè)定細(xì)胞凋亡率和分析細(xì)胞周期變化,以確定鎘是否可以誘導(dǎo)LLC-PK<,1>細(xì)胞凋亡.第三部分鎘誘導(dǎo)LLC-PK<,1>細(xì)胞凋亡及對(duì)bcl-2、p53、C-myc、C-fos與ras基因表達(dá)的影響采用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定bcl-2、p53、c-myc、c-fos與ras基因表達(dá)產(chǎn)物.第四部分鎘誘導(dǎo)LLC-PK<,1>細(xì)胞凋亡與脂質(zhì)過(guò)氧化的關(guān)系及VitC、VItE、硒與鎘聯(lián)合作用對(duì)LLC-PK<,1>細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的影響研究CdCl<,2>及