多巴胺D5受體對腎近曲小管上皮細胞腎胺酶的影響在高血壓發(fā)生中的作用研究.pdf

1、一、研究背景
　　 高血壓(essential hypertension，EH)及其并發(fā)癥已經成為影響人類健康的主要原因之一。交感活性的增高在高血壓的發(fā)病中發(fā)揮了重要作用，其主要原因是過多的去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)和腎上腺素(epinephrina，E)可以通過收縮血管引起血管張力升高，還可通過誘導氧化應激以及促進細胞凋亡等來影響血壓水平。但是，同屬交感神經遞質兒茶酚胺的多巴胺(dopamine，DA)

2、則在很多情況下通過激活多巴胺受體發(fā)揮著與NE、E相反的負性調控血壓作用。多巴胺受體為G蛋白偶聯(lián)受體，分為D1類(D1、D5)和D2類(D2、D3、D4)。激活多巴胺受體不僅可以誘導利鈉、利尿及血管舒張，而且可以直接影響交感活性。既往研究證實，激活交感神經節(jié)節(jié)前纖維多巴胺D1類或D2類受體，均可以減少神經末梢去甲腎上腺素的釋放。此外，多巴胺D4、D5受體基因敲除小鼠會出現顯著的交感活性增強，并發(fā)展成為高血壓。由此提示，多巴胺受體的激活會產

3、生對交感活性的負性調節(jié)作用。
　　 近年來，交感活性的增強在心血管疾病發(fā)病中的作用已被公認。腎胺酶(renalase)是目前發(fā)現的降解循環(huán)系統(tǒng)兒茶酚胺的單胺氧化酶。Renalase由腎臟合成并分泌，它與慢性腎病(Chronic Kindey Disease，CKD)和終末期腎病(End-stage Renal Disease，ESRD)患者高血壓的發(fā)病密切相關。renalase缺乏會導致循環(huán)系統(tǒng)中兒茶酚胺的增加和血壓的升高。re

4、nalase的活性和分泌受到兒茶酚胺的調節(jié)，激活多巴胺受體可以上調心肌細胞系H9C2細胞的renalase的基因轉錄。但作腎臟renalase的合成是否受到多巴胺受體的調節(jié)尚缺乏直接證據。多巴胺受體發(fā)揮調控交感活性的作用是否通過影響腎臟renalase這一途徑完成有待于證實。其中其主要主用的又是哪一個多巴胺受體亞型還有待于進一步研究。研究證實，多巴胺D1類受體和renalase均在腎近曲小管上皮細胞上表達豐富，由此我們推測，多巴胺受體通

5、過影響腎近曲小管上皮細胞renalase的表達和活性，進一步調節(jié)交感活性和血壓。
　　 二、研究目的
　　 1、比較WKY大鼠(Wistar-Kyoto rats)和自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneouslyhypertensive rats，SHR)成年大鼠腎組織中renalase的表達和活性的差異。
　　 2、觀察多巴胺D1類受體激動劑對腎臟近曲小管上皮細胞renalase的轉錄、蛋白表達及活性的影響。

6、r>　　 3、探索多巴胺D1類受體影響renalase的機制。
　　 4、比較多巴胺D1類受體調節(jié)腎近曲小管上皮細胞(renal proximal tubules，RPTs)的renalase在WKY和SHR的差異。
　　 三、研究方法
　　 1、腎近曲小管上皮株的培養(yǎng)(WKYRPT、SHR-RPT)。
　　 2、利用RT-PCR的方法檢測多巴胺Di類受體激動劑fenoldopam處理后，WKY-RPT

7、和SHR-RPT的renalase基因轉錄水平的改變。
　　 3、利用Western-blot方法，檢測WKY大鼠和SHR的腎臟中renalase表達的差異；并檢測多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam處理后WKY-RPT和SHR-RPT的renalase蛋白表達變化。
　　 4、利用NADH氧化活性法，檢測WKY大鼠和SHR腎臟中renalase活性差異；并檢測fenoldopam處理后WKY-RPT和SHR-RP

8、T的renalase蛋白和分泌活性的變化。
　　 四、研究結果
　　 1、WKY大鼠相比，SHR腎臟renalase表達和活性均顯著降低。
　　 2、激活多巴胺Di類受體，fenoldopam可以上調WKY-RPT的renalase的基因轉錄和蛋白表達，并可以上調其細胞蛋白中renalase的氧化活性，以及其分泌活性。
　　 3、刺激多巴胺D1類受體，fenoldopam可以下調SHR-RPT的renal

9、ase蛋白表達和蛋白活性，該作用均成一定的濃度依賴性。
　　 4、刺激多巴胺D1類受體上調WKY-RPT的renalase的作用，主要是通過多巴胺D5受體經由蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)這一中間信號分子完成。
　　 五、結論
　　 刺激多巴胺D1受體可上調WKY-RPT的renalase的蛋白表達、蛋白活性和分泌活性，該作用主要是經由Ds受體通過上調PKC的活性實現的。多巴胺Di類受體激