有毒生物堿的高效毛細(xì)管電泳分析以及激光誘導(dǎo)熒光技術(shù)的應(yīng)用探討.pdf

1、毒物分析是運(yùn)用化學(xué)和藥學(xué)的原理，采用科學(xué)的分析方法和高科技檢驗(yàn)手段，對(duì)進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)的毒物或可疑有毒物質(zhì)、毒品或其代謝物進(jìn)行提取、分離和分析，以查明中毒原因，澄清案件性質(zhì)，為偵查破案提供重要線索和為司法審判提供證據(jù)，同時(shí)也為醫(yī)療急救和預(yù)防制定措施提供依據(jù)。 高效毛細(xì)管電泳(HighPerformanceCapillaryelectrophoresis，HPCE)在法庭毒物分析中是一種新的檢測(cè)工具，這門技術(shù)融合了電泳和色譜技術(shù)，

2、儀器設(shè)備簡單，樣品和試劑損耗小，能提供多種檢測(cè)模式。 激光誘導(dǎo)熒光(LaserInducedFluorescence，LIF)作為一種高靈敏和微量的HPLC和HPCE檢測(cè)技術(shù)在很多方面得到了廣泛的應(yīng)用。與其它檢測(cè)方式相比，它最大的優(yōu)點(diǎn)是具有極高的靈敏度。 本研究主要包括以下兩方面的內(nèi)容： 一、應(yīng)用毛細(xì)管區(qū)帶電泳一紫外檢測(cè)建立了人體血與尿中14種常見有毒生物堿的系統(tǒng)分析方法，包括：烏頭堿類(烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭

3、堿)、高烏甲素、雪上一枝蒿甲素、莨菪堿類(阿托品、溴甲阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿)、茶堿、馬錢子堿、士的寧、奎寧和氯喹； 二、探討了毛細(xì)管區(qū)帶電泳一激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)技術(shù)在不同類型的毒物分析中的應(yīng)用，并建立了分析苯丙胺類毒物的系統(tǒng)方法，包括：苯丙胺、甲基苯丙胺、MDA、MDMA、麻黃堿和偽麻黃堿。 第一部分HPCE-UV在有毒生物堿分析中的應(yīng)用 由于上述幾種生物堿在性質(zhì)上有較大差異，無法在同一電泳條件下分開，因此將

4、它們分成兩組，對(duì)體外檢材和體內(nèi)檢材分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 第一組：高烏甲素、雪上一枝蒿甲素、阿托品、溴甲阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、馬錢子堿、士的寧、奎寧和氯喹。電泳條件為：毛細(xì)管柱75[tm×50．2cm，100mM磷酸鹽緩沖液(pH4．O)：CH3CN=95：5(v／v)，操作電壓16kV，柱溫25℃，壓力進(jìn)樣O．5psi×10s，檢測(cè)波長195nm，鹽酸普魯卡因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，分析時(shí)間為16min。 第二組：烏頭堿、次烏頭堿、新烏

5、頭堿和茶堿。電泳條件為：毛細(xì)管柱75[tm×50．2cm，70mMtris一50mM硼酸(pH8．62)，操作電壓16kV，柱溫25℃，壓力進(jìn)樣O．5psi×10s，檢測(cè)波長235nm，鹽酸麻黃堿為內(nèi)標(biāo)，分析時(shí)間為8min。 對(duì)于體外檢材，采用標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣，進(jìn)行方法學(xué)考察，并以烏頭堿類藥材(川烏、草烏)為代表，進(jìn)行提取回收率考察。對(duì)于體內(nèi)檢材(主要為血和尿)，樣品前處理采用Oasis小柱固相萃取，進(jìn)行方法學(xué)考察。 考

6、察了所建立方法的準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度、線性和定性指標(biāo)等。結(jié)果：本方法分離效率高，分析速度快，靈敏度高(尿樣或血樣中的最低檢測(cè)濃度可達(dá)5—40ng·mL-1，天內(nèi)和天間精密度、回收率均符合生物樣品分析的要求。 第二部分HPCE-LIF在毒物分析中的應(yīng)用探討 由于現(xiàn)有的氬原子激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長和發(fā)射波長均固定，分別為488nm和520nm，在此波長下所有的毒物均無熒光吸收，所以必須進(jìn)行熒光衍生化。通過實(shí)驗(yàn)篩選該波

7、長下衍生化試劑和挑選合適的可反應(yīng)的毒物，我們以苯丙胺類為代表，優(yōu)化衍生化條件和電泳條件，進(jìn)行方法學(xué)考察。 衍生化反應(yīng)條件：10mM、pHl0硼酸緩沖體系中，樣品與衍生化試劑的物質(zhì)的量之比n樣品：BFITC=1：10，加入O．1％吡啶／丙酮溶液20gL，避光、室溫反應(yīng)12h；電泳條件：毛細(xì)管50gtm×60cm，20mM、phi2硼砂緩沖液，操作電壓25kV，柱溫25℃。 本方法最大的特點(diǎn)是靈敏度高，尿樣和血樣中的最低檢測(cè)