芯片PCR產(chǎn)物在線-實時毛細(xì)管芯片電泳分離及激光誘導(dǎo)熒光檢測.pdf

1、直接對PCR產(chǎn)物進(jìn)行實時在線定性、定量分析在DNA分析中具有很強(qiáng)的實用意義，也是微流控芯片分析技術(shù)中具有很大挑戰(zhàn)性的研究課題。本論文基于自建的激光誘導(dǎo)熒光檢測平臺，在靜態(tài)芯片PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上，借助狹縫進(jìn)樣，實現(xiàn)了芯片PCR和毛細(xì)管芯片電泳的在線連接，實現(xiàn)了對擴(kuò)增產(chǎn)物的在線取樣、分離和檢測，還在此芯片系統(tǒng)上初步展示了對DNA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實時取樣和分離檢測的能力。
　　第一章對PCR反應(yīng)原理及PCR分類的發(fā)展情況進(jìn)行回顧，重點對實時

2、熒光定量PCR進(jìn)行了介紹;其次對集成毛細(xì)管電泳芯片技術(shù)中的基材、進(jìn)樣方式及不同檢測方法等情況進(jìn)行了綜述。
　　第二章以倒置顯微鏡為平臺建立了基于半導(dǎo)體激光器(487/532nm)的共聚焦激光誘導(dǎo)熒光(LIF)檢測系統(tǒng)，并對其性能進(jìn)行了表征，羅丹明B的最低檢出濃度為1×10-12mol/L。
　　第三章建立了基于狹縫進(jìn)樣的石英毛細(xì)管芯片電泳系統(tǒng)，以熒光探針分子對其重現(xiàn)性、分離度等參數(shù)進(jìn)行了表征?；讵M縫進(jìn)樣的峰高重現(xiàn)性為0.9

3、5％(n=9)，分離效率達(dá)2.66×105塔板數(shù)/m。該芯片具有制備方法簡單，操作方便，分離效率高和易于自動化等特點。
　　第四章基于狹縫進(jìn)樣的芯片毛細(xì)管電泳成功地用于DNA Marker、DNA及血漿中DYZ-1型性別基因擴(kuò)增產(chǎn)物等樣品的高效率（2.91×105塔板數(shù)/m）、高重現(xiàn)性的分離和檢測。該芯片電泳系統(tǒng)與靜態(tài)芯片PCR在線連接，實現(xiàn)了血漿中DYZ-1型性別基因產(chǎn)物的在線取樣、分離和檢測，初步展示了在PCR擴(kuò)增過程中對擴(kuò)增