Survivin原核高效、可溶性表達(dá)、純化及其在腫瘤診斷中的應(yīng)用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：在E.coli中獲取高效可溶性、高純度的重組Survivin融合蛋白；建立基于Survivin重組融合蛋白的anti-Survivin的血清檢測方法，為Survivin的深入研究及腫瘤的診斷奠定基礎(chǔ)。 方法：通過氨芐青霉素抗性、PCR和重組質(zhì)粒雙酶切對重組質(zhì)粒PET32-Survivin進(jìn)行鑒定；將重組質(zhì)粒PET32-Survivin轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞，通過氨芐青霉素抗性、PCR和PET32-Survivin重組質(zhì)粒雙

2、酶切篩選重組子轉(zhuǎn)化菌落，經(jīng)DNA測序及BLAST比對確認(rèn)Survivin基因序列正確性以及插入PET32質(zhì)粒的位點(diǎn)和方向；IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、Western blotting鑒定，鎳離子金屬螯合層析柱純化重組融合蛋白；建立基于重組融合蛋白Survivin特異性抗體的檢測方法，并對300份正常人血清、144份腫瘤患者血清進(jìn)行了檢測。 結(jié)果：Survivin DNA定向插入了pET32質(zhì)粒：獲得了高效、可溶性重組Survivin融合蛋

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