傳染性法氏囊病強(qiáng)、弱毒衣殼蛋白的可溶性表達(dá)、純化及應(yīng)用.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursaldisease virus, IBDV)引起的一種急性、致死性傳染病。該病毒主要感染3-6周齡雛雞，靶向中樞免疫器官法氏囊，大量破壞B淋巴細(xì)胞，引發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致雞的死亡。耐過(guò)雞表現(xiàn)為嚴(yán)重的免疫抑制，往往會(huì)導(dǎo)致其它疫苗的免疫失敗，而且對(duì)其它疫病的易感性增加。該病嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。<

2、br>　　VP2蛋白是IBDV的衣殼蛋白，不僅是主要免疫原，也是重要的毒力蛋白，而且在天然免疫中發(fā)揮重要作用。所以VP2在IBDV的免疫防控和致病機(jī)理研究方面非常關(guān)鍵。然而，可溶性且有活性的病毒衣殼蛋白通常難以制備，這制約了相關(guān)研究的發(fā)展。
　　Gx株是IBDV超強(qiáng)毒的中國(guó)參考毒株，對(duì)雞有高致病性;Gt是源于Gx株的傳代致弱毒株，對(duì)雞不致病，可作為疫苗株使用。本研究基于大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)，經(jīng)過(guò)一系列優(yōu)化，在冷休克條件下實(shí)現(xiàn)了IB

3、DV衣殼蛋白VP2的可溶性表達(dá)。進(jìn)而，集成親和層析串聯(lián)凝膠過(guò)濾的方法，獲得了較高純度的IBDV強(qiáng)、弱毒衣殼蛋白VP2。所表達(dá)的蛋白GxVP2、GtVP2(融合His標(biāo)簽)具有良好活性，均能自組裝成IBDV病毒樣顆粒(Virus-like particles，VLP)，與IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清能夠發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。
　　GxVP2、 GtVP2（融合His標(biāo)簽）均能刺激機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)產(chǎn)生較高滴度的抗體，對(duì)超強(qiáng)毒的攻擊能

4、夠產(chǎn)生90％的臨床保護(hù)。與GtVP2組相比，GxVP2組誘生了更高的中和抗體，能夠保護(hù)法氏囊不萎縮（平均BBIX為0.81），法氏囊病理學(xué)觀察僅見(jiàn)散在性的淋巴細(xì)胞壞死。超強(qiáng)毒VP2具有作為亞單位疫苗的潛在價(jià)值。
　　與VP2互作的宿主蛋白在IBDV的致病和免疫過(guò)程中發(fā)揮重要作用，然而其親和力均未被鑒定。本研究利用以“動(dòng)態(tài)記錄分子互作過(guò)程”為特點(diǎn)的Biacore大分子互作儀，分別研究了IBDV強(qiáng)、弱毒衣殼蛋白VP2與病毒細(xì)胞受體組分

5、雞熱激蛋白Hsp90α以及天然免疫重要接頭分子酪蛋白激酶CK1α的結(jié)合和解離過(guò)程，確定和比較了其親和力。IBDV衣殼蛋白VP2與Hsp90α具有強(qiáng)相互作用(10-8 M)，與CK1α具有中等相互作用(10-4 M)，強(qiáng)、弱毒VP2與Hsp90α或CK1α的親和力相當(dāng)。
　　本研究攻克了病毒衣殼蛋白不易可溶性表達(dá)的難題，成功獲得了高純度的IBDV強(qiáng)、弱毒VP2;該蛋白具有自組裝活性，超強(qiáng)毒VP2具有更好的免疫活性;分別確定了VP2與