傳染性法氏囊病強(qiáng)弱毒感染誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞凋亡差異的研究.pdf

1、傳染性法氏囊?。╥nfectious bursal disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus, IBDV）引起的雛雞的一種急性、高度接觸性、致死性傳染病。傳染性法氏囊病病毒(IBDV)以雞的免疫系統(tǒng)為靶器官，造成其免疫抑制。IBDV有血清I型和II型，僅血清I型對雞致病。血清I型病毒由于發(fā)生過兩次大的變異，到目前為止出現(xiàn)了三種毒株：經(jīng)典毒、變異株和超強(qiáng)毒株。目前，國

2、內(nèi)外針對IBDV基因功能及侵染機(jī)制的研究主要還是利用細(xì)胞適應(yīng)株或經(jīng)典株，針對超強(qiáng)毒株的研究還是相對較少。超強(qiáng)毒株與弱毒株在致病機(jī)制上的差異值得深入研究。
　　本研究選用IBDV超強(qiáng)毒Gx株、弱毒Gt株作為試驗(yàn)毒株，就它們對SPF雞的致病特性進(jìn)行了研究，以期在臨床致病特性、組織器官病理變化以及感染后靶細(xì)胞凋亡和壞死情況等方面尋找差異。結(jié)果表明，vvIBDV具有較高的致死率，與弱毒相比vvIBDV能引起感染雞靶細(xì)胞快速凋亡壞死，引起法

3、氏囊組織發(fā)生嚴(yán)重的病理變化，導(dǎo)致感染雞免疫系統(tǒng)的嚴(yán)重?fù)p傷。導(dǎo)致雞的急性死亡。
　　為了降低法氏囊B淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)的凋亡速度，更好地研究IBDV強(qiáng)弱毒侵染B淋巴細(xì)胞的情況。本研究設(shè)計(jì)分泌表達(dá)雞源CD154分子的功能區(qū)。根據(jù)GenBank中雞CD154的參考序列克隆其編碼區(qū)。通過融合PCR將CD154的C端與小鼠CD8α蛋白的N端串聯(lián)，并連接信號肽以利于分泌表達(dá)。結(jié)果顯示，融合蛋白成功表達(dá)，表達(dá)量隨時(shí)間的延長而增加，并且能夠成功分泌

4、到細(xì)胞外。雞CD154分子功能區(qū)的成功表達(dá)，為更好地在體外研究IBDV感染B淋巴細(xì)胞提供了很好的基礎(chǔ)。
　　在前兩部分內(nèi)容的基礎(chǔ)上，本研究利用IBDV強(qiáng)弱毒分別感染體外培養(yǎng)的雞原代B淋巴細(xì)胞，通過利用測定IBDV強(qiáng)弱毒感染B淋巴細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)的TCID50和ELD50以及通過熒光定量PCR等方式比較IBDV強(qiáng)弱毒在B淋巴細(xì)胞上復(fù)制特性，來進(jìn)一步研究IBDV強(qiáng)弱毒致病性差異的機(jī)制。結(jié)果顯示，vvIBDV能夠在其B淋巴細(xì)胞上快速復(fù)制