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1、該課題對(duì)IBD免疫監(jiān)測(cè)的間接ELISA方法進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化研究,并制備了相應(yīng)的診斷試劑盒.在酶標(biāo)抗體的制備方面,該研究對(duì)幾種提純IgG的方法(硫酸銨法、鹽酸-硫酸銨法、醋酸-硫酸銨法、辛酸-硫酸銨法和硫酸銨-辛酸法)作了比較.SDS-PAGE電泳和蛋白含量測(cè)定分析表明,辛酸-硫酸銨法和硫酸銨-辛酸法提取的IgG純度均較高,且硫酸銨-辛酸法提取的蛋白含量高于辛酸-硫酸銨法.采用改良過(guò)碘酸鈉法將提純的兔抗IBDV IgG和兔抗雞IgG進(jìn)行辣根過(guò)
2、氧化物酶(HRP)標(biāo)記,效果比較理想,二者工作濃度分別為1:1000,1:1200.該研究探討了MTT比色法用于檢測(cè)病科中IBDV在細(xì)胞培養(yǎng)物中增殖情況的應(yīng)用.經(jīng)反復(fù)試驗(yàn),該研究確立了間接ELISA檢測(cè)IBD抗體的最佳反應(yīng)條件.根據(jù)對(duì)32份SPF雞陰性血清檢測(cè)結(jié)果的平均值制定了間接ELISA判定標(biāo)準(zhǔn).在此基礎(chǔ)上研制出IBD間接ELISA快速診斷試劑盒,并對(duì)盒內(nèi)各組分的性狀、保存、質(zhì)量控制以及診斷試劑盒的特異性、敏感性、可重復(fù)性、符合率、
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