喉癌及癌旁正常黏膜組織中差異表達(dá)蛋白的研究.pdf

1、目的：
　　利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較喉癌及癌旁正常粘膜組織間的差異表達(dá)蛋白，探討喉癌組織中的特異表達(dá)蛋白，為喉癌的特異性診斷提供生物學(xué)標(biāo)記，為研究喉癌的發(fā)病機(jī)制，尋找與治療相關(guān)的靶標(biāo)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.取病理確診的喉鱗狀細(xì)胞癌組織及無腫瘤細(xì)胞侵犯的癌旁正常粘膜組織共5例，臨床分期為T1N3M01例、T2N2M01例、T1N2M02例、T1N1M01例。
　　2.采用有機(jī)溶劑提取法從新鮮喉癌及癌旁正常

2、粘膜組織中提取總蛋白，低溫有機(jī)溶劑沉淀法純化總蛋白；用蛋白質(zhì)雙向電泳（2-DE）技術(shù)、PDQuest7.1軟件獲得蛋白質(zhì)差異表達(dá)圖譜；通過基質(zhì)輔助激光解吸/電離時間飛行串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-TOF MS)技術(shù)，對所表達(dá)的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、鑒定和初步分析。
　　結(jié)果：
　　1.用2-DE技術(shù)獲得喉癌及癌旁正常粘膜組織的總蛋白分離圖譜，通過PDQuest7.1軟件比較分析，獲得同一對樣本中表達(dá)量相差3倍以上的10個差異

3、蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　2.通過MALDI-TOF-TOF MS質(zhì)譜技術(shù)鑒定，喉癌及癌旁正常粘膜組織間差異表達(dá)的10個蛋白質(zhì)點(diǎn)分別為：血紅蛋白(hemoglobin)、晶體蛋白（ crystallin）、錳超氧化物歧化酶（ Manganese Superoxide Dismutase）、肌酸激酶（muscle creatine kinase）、視黃醇結(jié)合蛋白（retinol-binding protein）、微管蛋白伴侶蛋白輔助因子 A（

4、Tubulin Chaperone Cofactor A）、 SFRS1 protein（ splicing factor, arginine/serine-rich1，SFRS1蛋白）、Annexin V、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（glucose regulated protein）、肌球蛋白（myosin）。
　　結(jié)論：
　　1、采用蛋白質(zhì)雙向電泳（2-DE）技術(shù)獲得蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜；通過PDQuest7.1軟件分析獲得了喉癌及癌旁

5、正常粘膜組織間表達(dá)差異的10個蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　2、通過對10個蛋白質(zhì)點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料綜合分析，差異蛋白中的血紅蛋白、錳超氧化物歧化酶、視黃醇結(jié)合蛋白、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及浸潤密切相關(guān)；晶體蛋白、肌球蛋白、肌酸激酶、Annexin V可作為臨床診斷標(biāo)志物或治療的靶標(biāo)， SFRS1蛋白、微管蛋白伴侶蛋白輔助因子A在喉癌中的作用尚不清楚。本結(jié)果為喉癌的特異性診斷提供了實(shí)驗(yàn)材料，為探討喉癌的發(fā)病機(jī)制，尋找與治療相