柞蠶桿狀病毒基因組的初步研究及家蠶yellow基因家族的克隆和序列分析.pdf

1、分子生物學(xué)的發(fā)展和桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)(baculovirusexpressionvectorsystems,BEVS)的改進(jìn)與完善，為成功表達(dá)各種具有生物活性的有用蛋白和疫苗提供了一條有效的途徑。目前多種桿狀病毒基因組全序列已被測定，而柞蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)由于多角體蛋白基因啟動子效率比較高、表達(dá)量高，成本低，有其獨特優(yōu)點，因此我們對柞蠶桿狀病毒基因組進(jìn)行了初步研究。采用隨機(jī)克隆方法，建立柞蠶桿狀病毒的質(zhì)?；蛭膸?，通過對插入片段進(jìn)行克

2、隆鑒定和序列分析，獲得了柞蠶桿狀病毒的三個新基因，并對其序列進(jìn)行了分析。 1在基因結(jié)構(gòu)上，odv-e56基因上游具有晚期調(diào)控保守序列TTAAG，是一晚期表達(dá)基因，其推定的ORF為1125bp，共編碼374個氨基酸，基因內(nèi)部有一個保守的糖基化位點、六個半胱氨酸殘基和兩個疏水區(qū)；ie-2和pe-38基因都是極早期表達(dá)基因，其推定的開放閱讀框分別編碼295和302個氨基酸，并且內(nèi)部含有一個保守的鋅指結(jié)構(gòu)和亮氨酸拉鏈。 2核苷酸

3、和氨基酸同源性比較結(jié)果表明：柞蠶核型多角體病毒的odv-e56基因與黃杉毒蛾多角體病毒最高，而與松樹葉蜂多角體病毒同源性最低；ie-2和pe-38基因都與黃杉毒蛾多角體病毒的同源性較高，與家蠶的同源性比較低。 3在分子進(jìn)化上，柞蠶桿狀病毒odv-e56基因可能存在兩種進(jìn)化方式：一類以點突變?yōu)橹?，基因長度變化不明顯，另一類突變以小片段的堿基增減為特征;ie-2和pe-38基因則出現(xiàn)大片段缺失，是研究物種分子進(jìn)化比較典型的基因。

4、 在家蠶EST文庫中，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)了有關(guān)細(xì)胞凋亡基因、組織分化基因、蛋白酶抑制劑、抗菌肽基因等許多已知功能EST，以及組織和時期特異表達(dá)基因，是家蠶分子生物學(xué)研究的活躍領(lǐng)域。本文通過用果蠅yellow基因的保守區(qū)MRJP檢索家蠶EST文庫，獲得一系列同源性的EST，構(gòu)建了家蠶yellow基因家族，并分析了其序列及組織表達(dá)分布。 1通過用果蠅yellow基因的MRJP的保守區(qū)序列檢索家蠶的EST文庫，共檢索到74條與其同源的家

5、蠶EST序列，應(yīng)用DNAstar、ClustalX程序進(jìn)行分類拼接，獲得七個都具有部分MRJP保守區(qū)的基因片段，組成一個基因家族，且與果蠅的yellow基因家族成員都有同源性故命名為家蠶yellow基因家族(Bm-yellowfamily)。 2應(yīng)用cDNA末端快速擴(kuò)增的方法補全了其中六個家族成員(Bm-yellow1-6)，其中Bm-yellow1-5都有一個保守、完整的MRJP結(jié)構(gòu)，Bm-yellow6只有部分MRJP結(jié)構(gòu)，

6、每一個成員在N末端都有17-26個疏水信號肽。在家族遺傳進(jìn)化分析上可以明確得出，家蠶yellow基因家族是一單系群體，且基因間同源性比較低。 3從組織表達(dá)分布上，Bm-yellow1和Bm-yellow5在所有器官都有表達(dá)，Bm-yellow3除了血淋巴中沒有表達(dá)之外，在其它器官都有表達(dá);Bm-yellow4除了中腸和絲腺和熟蠶期的馬氏管沒有表達(dá)之外，在其它組織都有表達(dá)；Bm-yellow6只在頭部、翅原基、體壁、性腺和熟蠶期的