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文檔簡介
1、眾所周知，家蠶桿狀病毒(BmNPV)多角體啟動子具有超高效的啟動功能，在昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)中常被用來啟動外源基因的表達。通過酵母單雜交技術(shù)篩選出多種與多角體啟動子存在相互作用的蛋白因子，其中ORF60蛋白被認為是BmNPV的DNA結(jié)合蛋白，且可能具有調(diào)控病毒基因轉(zhuǎn)錄的功能，但其調(diào)控機制還不是很清楚。
本研究構(gòu)建了orf60缺失型病毒orf60-ko-Bacmid。Bac-to-Bac技術(shù)將敲除的片段再次補回到家蠶桿狀病毒(B
2、mNPV)基因組中，通過此技術(shù)，我們又成功的構(gòu)建了orf60補回型病毒orf60-re-Bacmid。然后將三種病毒（wtBacmid、orf60-ko-Bacmid和orf60-re-Bacmid）分別轉(zhuǎn)染家蠶BmN細胞，病毒滴度和熒光定量PCR(qPCR)實驗結(jié)果表明，orf60是BmNPV基因組復制的必需基因，也是包裝成成熟病毒的必需基因。反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR(RT-qPCR)分析orf60基因的轉(zhuǎn)錄時相，結(jié)果表明orf60基因是
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