桿狀病毒早期感染對(duì)家蠶血淋巴細(xì)胞的影響以及宿主細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)以BmNPV-家蠶血淋巴細(xì)胞這一系統(tǒng)為研究對(duì)象,運(yùn)用家兔免疫的方法獲得病毒粒子的多克隆抗體再輔助二抗標(biāo)記實(shí)現(xiàn)在In vivo的條件下標(biāo)記病毒粒子,建立一個(gè)In vivo的條件下利用激光共聚焦技術(shù)實(shí)時(shí)研究病毒感染的新方法.運(yùn)用BmNPV的病毒粒子實(shí)時(shí)采集的家蠶血淋巴細(xì)胞感染吸附后的一個(gè)小時(shí)計(jì)為0時(shí)間,激光共聚焦實(shí)時(shí)跟蹤時(shí)間為1-3小時(shí).跟蹤研究病毒在感染早期對(duì)于宿主細(xì)胞的鈣離子和線粒體的影響.實(shí)驗(yàn)通過對(duì)正常與病毒感染細(xì)胞內(nèi)以Fluo

2、-3標(biāo)記鈣離子的熒光信號(hào)的實(shí)施跟蹤,采集細(xì)胞范圍內(nèi)熒光信號(hào)數(shù)據(jù),觀察其變化過程.發(fā)現(xiàn):在正常情況下家蠶血淋巴細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化具有規(guī)則的波動(dòng)性,振幅一致,周期較為恒定約為900s,且相鄰的細(xì)胞具有相同的波動(dòng)特征以及良好的同步性;在病毒感染的情況下,鈣離子濃度總體上有所增加,且波動(dòng)周期延長、濃度變化的靈敏度降低.說明病毒感染會(huì)影響正常條件下鈣離子有規(guī)律的釋放與聚集的過程,推測(cè)感染早期病毒攜帶的病毒編碼的糖蛋白修飾質(zhì)膜所造成的胞內(nèi)一些細(xì)

3、胞器(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等)的膜通透性損傷性改變是胞內(nèi)鈣離子濃度增加,是鈣離子聚集與釋放過程失調(diào)的主要原因.病毒依賴細(xì)胞骨架的質(zhì)-核運(yùn)輸過程也是鈣離子濃度升高的一個(gè)因素.而相鄰細(xì)胞鈣離子濃度變化的一致性體現(xiàn)了通過鈣離子而實(shí)現(xiàn)的細(xì)胞間信號(hào)傳遞過程.實(shí)驗(yàn)通過與研究鈣離子相同的病毒感染方式對(duì)正常與病毒感染細(xì)胞內(nèi)以Rhodamine123標(biāo)記線粒體的熒光信號(hào)的實(shí)施跟蹤發(fā)現(xiàn):線粒體的膜電位在細(xì)胞正常條件下也具有規(guī)則的波動(dòng)性,周期恒定約為500s,但是

4、在波形上與鈣離子的波動(dòng)有著比較大的差別,而在病毒感染的條件下線粒體的活性變化具有三種不同的紊亂形式.說明線粒體的膜電位可以反映線粒體膜上呼吸鏈的狀態(tài),即體現(xiàn)了線粒體功能狀態(tài)以及活性.而其在病毒感染的條件下的三種不同的紊亂形式,體現(xiàn)了病毒與宿主細(xì)胞之間的相互作用的不同結(jié)果.推測(cè)為宿主細(xì)胞死亡、凋亡或?yàn)閷?duì)病毒感染的可承受狀態(tài).綜合以上可認(rèn)為病毒感染早期就會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞的產(chǎn)能系統(tǒng)、信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)、保護(hù)酶系統(tǒng)產(chǎn)生一定的影響,造成宿主細(xì)胞不同的應(yīng)激反