淋巴細(xì)胞遷移對(duì)移植免疫反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、移植免疫排斥問(wèn)題始終是困擾器官移植界及免疫學(xué)界的一個(gè)難題.免疫抑制劑的應(yīng)用帶來(lái)一系列問(wèn)題,如感染、腫瘤高發(fā)等.通過(guò)各種手段使患者擺脫移植后的長(zhǎng)期藥物的依賴,免除免疫抑制劑的使用或最大程度地減少藥物的劑量,達(dá)到移植物與受者的長(zhǎng)期良好存活,是移植領(lǐng)域的最終目標(biāo).細(xì)胞遷移過(guò)程是研究器官移植免疫反應(yīng)的一個(gè)重要課題.近年來(lái)趨化因子在細(xì)胞遷移過(guò)程中的作用得到了充分的重視,認(rèn)為淋巴細(xì)胞的遷移在很大程度上受到趨化因子的影響.目前淋巴細(xì)胞向二級(jí)淋巴器官的

2、遷移過(guò)程已經(jīng)被逐漸闡明,這是一個(gè)多步驟的聯(lián)級(jí)反應(yīng),受到多種因子的調(diào)控.其中淋巴細(xì)胞表面的CCR7與配體CCL19、CCL21的相互作用起到極為重要的作用,是淋巴細(xì)胞進(jìn)入淋巴結(jié)的關(guān)鍵.在二級(jí)淋巴器官內(nèi)部,CCR7與CCL19的作用繼續(xù)維持淋巴細(xì)胞的游走.另外樹突狀細(xì)胞的遷移也受CCR7及配體作用的調(diào)控.CCR7基因敲除小鼠(CCR74-)是由德國(guó)的Forster教授于1999年制備成功,CCR7<'-/->小鼠最大的特征是由于CCR7的缺

3、失,導(dǎo)致淋巴細(xì)胞遷移功能的損害,使其向二級(jí)淋巴組織歸巢的過(guò)程受阻. 最初的研究表明,受者的二級(jí)淋巴器官在免疫排斥反應(yīng)中是必需的.Lakkis等的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)缺乏二級(jí)淋巴器官的aly/aly小鼠無(wú)法排斥同種異體的心臟移植物.但是最近Zhou等在另兩種淋巴結(jié)缺失的LTα<'-/->和LTβR<'-/->小鼠中卻發(fā)現(xiàn),雖然異體心臟與皮膚移植物在這兩種受者中存活時(shí)間明顯延長(zhǎng),但是卻并未達(dá)成耐受狀態(tài).另外,plt/plt小鼠是缺乏CCR7配體

4、CCL19與CCL21的基因敲除小鼠,其二級(jí)淋巴器官也是空虛的.移植結(jié)果同樣表明,心臟移植物的存活時(shí)間得以有限延長(zhǎng),但耐受狀態(tài)卻并不存在.上述結(jié)果均提示了二級(jí)淋巴器官在移植排斥過(guò)程中并非必須,但這些研究均是在二級(jí)淋巴器官缺失的基因敲除小鼠中進(jìn)行,尚少見在淋巴細(xì)胞遷移受體缺失的受者中進(jìn)行的研究.如CCR7<'-/->小鼠,其淋巴細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞因缺乏CCR7而無(wú)法遷移至淋巴結(jié)內(nèi),僅能在外周組織中循環(huán),其效應(yīng)與淋巴器官缺失是類似的.因此,本

5、研究是在CCR7<'-/->小鼠基礎(chǔ)上進(jìn)行一系列的移植研究實(shí)驗(yàn),總體而言分為四個(gè)方面的探索:一、以CCR7<'-/->小鼠作為受者,研究淋巴細(xì)胞遷移障礙的受者對(duì)同種異體移植物的排斥情況及耐受狀態(tài)是否達(dá)成.二、以CCR7<'-/->小鼠作為供者,其供者器官內(nèi)的樹突狀細(xì)胞無(wú)法游走遷移到受者的二級(jí)淋巴器官,從而在理論上無(wú)法遞呈供者抗原,以研究這一狀態(tài)下的器官移植排斥狀態(tài).三、以CCR7<'-/->小鼠分別作供受者,以研究這兩種效應(yīng)結(jié)合對(duì)移植物

6、存活與排斥反應(yīng)的影響.四、采用經(jīng)典的免疫誘導(dǎo)方案研究CCR7的缺失對(duì)移植免疫耐受狀態(tài)的影響. 小腸移植(small bowel transplantation,SBTx)是治療不可逆小腸功能衰竭的有效手段,由于小腸的免疫原性很高,且富含淋巴組織及腸道菌群,可以導(dǎo)致很難控制的排斥反應(yīng).與其他的實(shí)質(zhì)性器官移植相比較,臨床小腸移植依然未取得滿意的結(jié)果.因此,迫切需要尋求一種高效、低毒、高度特異性的治療方案,以減少小腸移植的排斥反應(yīng).F

7、TY720是一種新型免疫調(diào)節(jié)劑,其作用是可以促進(jìn)外周淋巴細(xì)胞進(jìn)入二級(jí)淋巴器官,從而導(dǎo)致外周血中淋巴細(xì)胞減少,起到免疫調(diào)節(jié)作用.FTY720的藥物特性,使促進(jìn)淋巴細(xì)胞遷移的手段應(yīng)用于免疫耐受的誘導(dǎo)與調(diào)節(jié)成為可能.共刺激通道阻斷劑是廣泛使用的免疫耐受手段,其中CD40-CD40L(MR1為抗小鼠CD40L單抗)通道阻斷是最為常用與最為有效的方法.在一系列的小鼠移植模型中,MR1聯(lián)合DST均能有效地誘導(dǎo)免疫耐受,但是在小鼠的SBTx中,小腸移

8、植物的存活均未得到改善. CD40-CD40L共刺激通道阻斷方案誘導(dǎo)免疫耐受的依賴于T淋巴細(xì)胞進(jìn)入到二級(jí)淋巴器官.本文在成功建立小鼠小腸移植模型的基礎(chǔ)上,試圖驗(yàn)證這樣的假設(shè):運(yùn)用FTY720促進(jìn)T淋巴細(xì)胞進(jìn)入二級(jí)淋巴器官,并延長(zhǎng)其滯留時(shí)間,同時(shí)聯(lián)合CD40-CD40L共刺激通道阻斷,以增強(qiáng)誘導(dǎo)小腸移植物免疫耐受的效果. 研究得出如下結(jié)論： 1、同種異體移植物在CCR7缺失的受者中存活時(shí)間延長(zhǎng),仍可引起免疫排斥反