移植前供鼠口服受鼠脾淋巴細胞對移植后GVHD影響的實驗研究.pdf

1、目的：本課題旨在研究探討經(jīng)口服受鼠脾淋巴細胞誘導(dǎo)耐受的供鼠淋巴細胞輸注是否能減輕移植物抗宿主病(GVHD)，并保留最大的GVL效應(yīng)。該研究為臨床防治移植物抗宿主病提供新的思路。 方法：以健康清潔級雄性DBA-2(H-2<'d>)小鼠為供者，隨機分成4組(1-4組)，分別用BALB/C鼠脾淋巴細胞、DBA鼠脾淋巴細胞、牛血清蛋白、普通飼料喂養(yǎng)，隔天喂養(yǎng)。單向MLR評估誘導(dǎo)耐受狀態(tài)。以雌性BALB/C小鼠(H-2<'d>)為受者，隨

2、機分成8組(A-D組，A<,1>-D<,1>組)。受鼠均給予<'60>Cor射線全身照射(6.0Gy)，A-D組受鼠同一天輸注3×10<'3>鼠P388白血病細胞，尾靜脈輸注來自于供者DBA-2小鼠的2×10<'7>脾淋巴細胞。A<,1>-D<,1>組受鼠不給予鼠白血病細胞輸注，僅尾靜脈輸注來自于供者DBA-2小鼠的2×10<'7>脾淋巴細胞。每日觀察A<,1>-D<,1>組受鼠體形、體位、毛發(fā)、進食及精神情況，稱量體重，觀察受鼠GVH

3、D一般表現(xiàn)。取發(fā)生GVHD的A<,1>-D<,1>組受鼠的肝臟、小腸、皮膚制作組織病理切片，觀察GVHD程度。A<,1>-D<,1>組受鼠外周血作流式細胞檢測CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值進行免疫監(jiān)測。記錄A-D組小鼠外周血白細胞計數(shù)，觀察小鼠患白血病及死亡情況。 結(jié)果：接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的受鼠，出現(xiàn)弓背體位、翹毛、消瘦、精神萎靡、腹瀉等GVHD表現(xiàn)，與接受非耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的受鼠GVHD表現(xiàn)

4、相比較有所減輕。接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的A<,1>組受鼠平均體重增加4.45g，與其他各組相比較體重增加明顯(B<,1>、C<,1>、D<,1>組受鼠平均體重增加分別為2.05g、1.9g、1.88g)。病理切片檢查符合GVHD表現(xiàn)，接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的Al組受鼠GVHD表現(xiàn)減輕于其他組：肝臟：慢性肝炎樣改變，肝細胞水樣變性，肝索結(jié)構(gòu)紊亂、解離；小腸：絨毛結(jié)構(gòu)破壞，固有層有淋巴細胞浸潤，可見粘膜的破潰脫落；皮膚；真皮

5、層內(nèi)毛細血管擴張，淋巴細胞浸潤。流式細胞術(shù)監(jiān)測顯示接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的A<,1>組受鼠外周血CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值(6.81+0.635)明顯升高，與其他各組比較(CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值分別為2.19±0.449、2.70±0.303、3.04±0.393)有顯著性差異(P<0.05)。接種白血病細胞的A-D組受鼠，各組發(fā)生白血病患病后死亡率無差別(X<'2>=0.904 P>0.