基于代謝組學(xué)的炙淫羊藿炮制機(jī)理研究.pdf

1、淫羊藿-----我國的傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥，最初記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》上，其具有補(bǔ)腎壯陽，強(qiáng)健筋骨，祛除風(fēng)濕的療效。臨床上常采用羊脂油對淫羊藿進(jìn)行炮制，療效顯著。本課題組前期研究表明:體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，淫羊藿中所含黃酮苷的吸收滲透系數(shù)存在差異性;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)炮制過程中的“加熱”作用可以促使淫羊藿產(chǎn)生更多易于吸收的生物活性黃酮（例如淫羊藿苷以及寶藿苷Ⅰ）。這些研究均是從腸吸收角度來闡釋淫羊藿的炮制機(jī)理，但是淫羊藿炮制后的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其補(bǔ)腎壯陽增效

2、機(jī)制仍不清楚，需要進(jìn)一步研究。因此，本文基于代謝組學(xué)，整體上研究了淫羊藿炮制后化學(xué)成分的變化及其補(bǔ)腎壯陽的增效機(jī)制。從植物代謝組學(xué)方面，比較研究了淫羊藿炮制前后次生代謝產(chǎn)物的差異，期望找出炙淫羊藿的物質(zhì)基礎(chǔ);從藥物代謝組方面研究朝藿定A、箭藿苷B、寶藿苷Ⅰ在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物及其代謝途徑，以期尋找淫羊藿炮制后的增效物質(zhì)基礎(chǔ);基于生物代謝組學(xué)，研究了腎陽虛潛在的生物標(biāo)志物，比較了淫羊藿生品與炮制品對腎陽虛大鼠血漿代謝譜的調(diào)節(jié)作用，以期從整

3、體上評價(jià)炙淫羊藿補(bǔ)腎助陽的增效機(jī)制。
　　本論文對炙淫羊藿的炮制機(jī)理研究、代謝組學(xué)的概況和其在中藥及其炮制中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述，實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)主要分為以下幾個(gè)部分:
　　(1)采用纖維素酶水解朝藿定B的方法制備箭藿苷B，酶解反應(yīng)的最佳工藝為pH5.6、溫度50℃、酶與底物的質(zhì)量比0.6、底物質(zhì)量濃度20 mg·mL-1和反應(yīng)時(shí)間24 h。該方法簡單可行，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率高，為后續(xù)代謝實(shí)驗(yàn)奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　(2)先采用UPLC-QT

4、OF-MS技術(shù)研究了淫羊藿生品和炮制品的指紋圖譜變化，共標(biāo)出40個(gè)化合物，解析出32個(gè)，均為黃酮類化合物;在此基礎(chǔ)上基于代謝組學(xué)，采用正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)法比較了淫羊藿炮制前后次生代謝產(chǎn)物的差異，確定了11個(gè)顯著性差異次生代謝產(chǎn)物，并鑒定了其中9個(gè)，分別為8-乙烯-山奈酚，淫羊藿素，淫羊藿次苷Ⅰ/淫羊藿素-3-O-glc，異戊醇基箭藿苷B，淫羊藿素-3-O-rha2(4-OAc)-glu(2OAc)，1，3-異戊二

5、烯基朝藿定C和1，3-異戊二烯基-箭藿苷B-7-O-GluA。
　　(3)采用UPLC/Q-TOF分析技術(shù)鑒定三糖苷（朝藿定A）、二糖苷（箭藿苷B）和單糖苷（寶藿苷Ⅰ）吸收進(jìn)入大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，并闡明這些代謝產(chǎn)物在大鼠血漿、膽汁、尿液和糞便中的代謝途徑，進(jìn)而從定性角度闡明朝藿定A、箭藿苷B和寶藿苷Ⅰ在大鼠體內(nèi)的代謝規(guī)律。
　　(4)基于生物代謝組學(xué)方法，建立氫化可的松腎虛模型并采用正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)

6、法，確定了腎陽虛潛在的生物標(biāo)志物9個(gè)，鑒定出其中5個(gè)生物標(biāo)志物，分別為硬脂酰溶血卵磷脂、十六烷基甘油磷脂酰膽堿、花生四烯?；苎蚜字営王；视土字Ｄ憠A、十六烷酸溶血磷脂酰膽堿;在此基礎(chǔ)上采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)法比較了淫羊藿生品與炮制品干預(yù)后腎陽虛大鼠血漿中這些生物標(biāo)志物的差異和水平變化，同時(shí)將這些標(biāo)志物輸入KEGG數(shù)據(jù)庫中構(gòu)建代謝通路，進(jìn)而從整體上評價(jià)炙淫羊藿補(bǔ)腎助陽的增效作用及其機(jī)