2005_淫羊藿的炮制機(jī)理

1、摘要：摘要：研究假說(shuō)：中藥經(jīng)炮制后可提高活性成分的吸收，從而達(dá)到增加藥效的目的。本研究選擇淫羊藿（EpimediumkeanumNakai.），利用ADMETox平臺(tái)研究單體活性成分EpimedinA、EpimedinB、EpimedinC、Icariin、BaohusideⅠ的吸收、代謝機(jī)理與動(dòng)力學(xué)及淫羊藿炮制品的標(biāo)準(zhǔn)提取物中這5個(gè)主要活性成分的吸收與代謝及其相互作用。從中藥活性成分吸收與代謝的角度闡明淫羊藿的炮制機(jī)理。中藥炮制的科學(xué)

2、研究起步較晚，對(duì)減毒或增效的物質(zhì)基礎(chǔ)及炮制機(jī)理研究較少。目前對(duì)中藥炮制機(jī)理的闡述只是停留在該過(guò)程的兩端即化學(xué)成分的變化和藥理藥效層面，而對(duì)闡明炮制機(jī)理的重要環(huán)節(jié)——炮制前后有效成分的吸收、代謝研究不夠深入，本課題擬從更深層次上闡明中藥炮制機(jī)理，同時(shí)為制定合理的炮制工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高科學(xué)依據(jù)，為中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化做出更大貢獻(xiàn)。(一)立項(xiàng)依據(jù)與研究?jī)?nèi)容依據(jù)與研究?jī)?nèi)容（40008000字）1.項(xiàng)目的立目的立項(xiàng)依據(jù)依據(jù)1.1中藥炮制是我國(guó)人民在

3、數(shù)千年的醫(yī)療實(shí)踐中不斷總結(jié)、改進(jìn)、發(fā)展形成的一套傳統(tǒng)制藥技術(shù)，和中藥復(fù)方一起構(gòu)成了祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)的兩大鮮明特色。目前對(duì)中藥炮制機(jī)理研究所采用的方法有：①應(yīng)用化學(xué)方法進(jìn)行研究[1]：中藥的療效，是由于其所含的化學(xué)成分決定的。中藥經(jīng)過(guò)炮制后，所含的化學(xué)成分的性質(zhì)和含量會(huì)產(chǎn)生不同程度的改變，因而藥理作用、臨床療效也會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化，可見(jiàn)，研究中藥炮制前后化學(xué)成分性質(zhì)和含量的變化是中藥炮制機(jī)理研究的重要內(nèi)容，該方法在一定程度上能闡明炮制原理，而且能指

4、導(dǎo)炮制工藝的設(shè)計(jì)和改進(jìn)，也是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要依據(jù)。蔡寶昌等[2，3]測(cè)定了馬錢子不同炮制品中生物堿和馬錢子苷的含量，表明炮制后生物堿和馬錢子苷的含量均降低；蔡寶昌等[4]從炮制前后的馬錢子中提取鑒定了16個(gè)生物堿，其中異馬錢子堿等為新生物堿；②應(yīng)用實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)方法進(jìn)行研究[1]：中藥的臨床研究由于受到復(fù)方用藥和患者對(duì)象的制約，一般不易進(jìn)行，加上很多中藥化學(xué)成分研究還缺乏與藥效的緊密聯(lián)系，或者尚屬空白，因此實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)的研究也是揭示中藥炮制

5、機(jī)理的方法之一。應(yīng)用實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)的方法研究中藥炮制，主要選用適合中醫(yī)病理模型的方法和指標(biāo)來(lái)進(jìn)行，或選用已有的藥理方法和指標(biāo)來(lái)進(jìn)行。在化學(xué)成分不清的情況下，通過(guò)實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)的方法來(lái)研究炮制前來(lái)源是人結(jié)腸癌細(xì)胞同源性好，可用于區(qū)分腸腔內(nèi)不同吸收途徑的差別。①Caco2細(xì)胞模型的基本特點(diǎn)Caco2細(xì)胞系結(jié)構(gòu)和生化作用類似于人小腸上皮細(xì)胞含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系與正常的成熟小腸上皮細(xì)胞在體外培育過(guò)程中出現(xiàn)逆向分化(反分化)不同Caco2細(xì)胞在

6、傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)在多孔的可滲透的聚酯(Polycarbonate)膜上可達(dá)到融合并自發(fā)分化為腸上皮細(xì)胞形成連續(xù)的單層(monolayer)[8]。培育約10ｄ后單層的跨膜電阻約為2600Ωcm2細(xì)胞密度約為0.9106細(xì)胞cm2此時(shí)Caco2細(xì)胞單層對(duì)漏出標(biāo)志物如聚乙二醇(Mr4000)或甘露醇是不滲透的這種性質(zhì)可以維持恒定約20ｄ由于Caco2細(xì)胞性質(zhì)類似小腸上皮細(xì)胞因此可以在這段時(shí)間進(jìn)行藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)[910]。②Cac

7、o2細(xì)胞模型的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理在Caco2細(xì)胞模型中藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程為:藥物分子從Caco2單細(xì)胞層的頂側(cè)腸腔側(cè)(ＡＰ側(cè))跨過(guò)Caco2單細(xì)胞層或經(jīng)由細(xì)胞間隙到達(dá)基底側(cè)(ＢＬ側(cè))。藥物跨過(guò)腸上皮有4條途徑:①被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)②胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)③載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)④胞飲。(2)在體腸灌流模型特點(diǎn)：保證了腸道神經(jīng)以及內(nèi)分泌輸入的完好無(wú)損同時(shí)也保證了血液及淋巴液的供應(yīng)提高了生物活性。在該模型中還可測(cè)定腸道代謝物。該法既可從腸腔取樣又可從血液中取樣。雖然這些研究常在麻醉的

8、小動(dòng)物上進(jìn)行但借助腸插管非麻醉的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人體的灌流研究亦可進(jìn)行[11]。在體腸道灌流不僅提供了較高的組織活性而且提供了額外的取樣部位。已經(jīng)建立了鼠腸原位灌流實(shí)驗(yàn)取得的藥物腸道滲透率同人體研究中口服給予藥物溶液后吸收的藥物量之間的關(guān)系。HuM.等學(xué)者采用Coca2和腸灌流模型等方法對(duì)黃酮和類黃酮成分的吸收與代謝進(jìn)行了研究[12～19]；研究結(jié)果表明[19～23]：黃酮苷類化合物在腸道中降解成苷元再吸收，而淫羊藿苷主要是以它的次級(jí)鼠李糖苷

9、形式吸收。類黃酮的吸收與代謝途徑可歸納為Fig1。1.4淫羊藿為傳統(tǒng)補(bǔ)腎中藥，在民間沿用已有千年歷史，具補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕功效。臨床常用于陽(yáng)痿遺精，筋骨痿軟，風(fēng)濕痹痛等證。淫羊藿中含多種黃酮類成分，目前研究證明[24]：淫羊藿總黃酮為淫羊藿主要活性成分淫羊藿總黃酮為淫羊藿主要活性成分。淫羊藿總黃酮在心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、抗炎、抗骨質(zhì)疏松、抗衰老、抗腫瘤等[25]方面取得較大的進(jìn)展。臨床常見(jiàn)的淫羊藿炮制品有淫羊