基于中藥黃酮藥動學(xué)的炙淫羊藿炮制機理研究.pdf

1、淫羊藿(Epimedium davidii Franch.)為我國傳統(tǒng)的補益中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其主要藥用成分有淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ(淫羊藿次苷Ⅱ)、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿次苷Ⅰ等，具有補腎陽，強筋骨，祛風(fēng)濕的功效。臨床用淫羊藿歷來均以炮制品為主，而羊脂油炙淫羊藿飲片應(yīng)用最為普遍，且療效極為顯著。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)：淫羊藿所含黃酮苷體外和在體試驗中的吸收滲透系數(shù)存在差異，次級糖苷的吸收大于多級糖苷的吸收(寶藿苷Ⅰ>

2、淫羊藿苷>朝藿定A，B，C)；在炮制過程中，“加熱”可以使淫羊藿主要活性黃酮的含量發(fā)生變化，即炮制使淫羊藿產(chǎn)生了更多的易于吸收的生物活性黃酮(如淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ)。但炮制前后淫羊藿黃酮類成分滲透系數(shù)的差異是否轉(zhuǎn)化為生物利用度的提高進而表現(xiàn)為藥效的增效，以及炮制輔料羊脂油對淫羊藿中黃酮類成分吸收的影響需要進一步研究。因此本文從藥代動力學(xué)角度，采用大鼠和斑馬魚兩個模型研究淫羊藿苷等主要活性黃酮的體內(nèi)代謝、排泄過程；并采用血藥濃度法研究淫羊

3、藿生品和不同炮制品的吸收差異，從定性和定量兩個角度進一步探討炙淫羊藿的炮制機理。
　　本論文首先對淫羊藿黃酮的藥代動力學(xué)的研究進展進行了文獻綜述，實驗部分主要完成以下內(nèi)容：
　　(1)采用UPLC/Q-TOF技術(shù)分析鑒定淫羊藿中主要黃酮成分淫羊藿苷吸收進入大鼠體內(nèi)的原型及其代謝產(chǎn)物，闡明了淫羊藿苷在血漿、膽汁、尿液、糞便中主要代謝產(chǎn)物的代謝途徑，從定性角度揭示了淫羊藿苷在體內(nèi)的變化規(guī)律；淫羊藿苷經(jīng)大鼠灌胃后，在血漿中除原型藥

4、淫羊藿苷外，共鑒定7個代謝產(chǎn)物，其中4個為首次發(fā)現(xiàn)；在膽汁中除淫羊藿苷外，共鑒定5個代謝產(chǎn)物，其中3個為首次發(fā)現(xiàn)；在尿液中共鑒定4個代謝產(chǎn)物，其中2個為首次發(fā)現(xiàn)；在糞便中除淫羊藿苷外，共鑒定9個代謝產(chǎn)物，其中8個為首次發(fā)現(xiàn)。
　　(2)首次采用模式生物斑馬魚模型研究淫羊藿中四種主要活性黃酮淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、朝藿定A和朝藿定C的代謝，并利用HPLC-ESI-MS分析技術(shù)檢測代謝產(chǎn)物。經(jīng)斑馬魚作用后，淫羊藿苷產(chǎn)生脫糖基產(chǎn)物寶藿苷Ⅰ，

5、而寶藿苷Ⅰ未發(fā)生轉(zhuǎn)化；朝藿定A產(chǎn)生了脫去兩分子葡萄糖的產(chǎn)物寶藿苷Ⅰ，朝藿定C產(chǎn)生了脫去一分子葡萄糖的產(chǎn)物2"-O-rhamnosylicarisideⅡ。本文探索了斑馬魚用于中藥黃酮類成分在體代謝的可行性及合理性，為中藥黃酮類成分的代謝研究提供了一種簡單高效的新模型。
　　(3)采用HPLC-ESI-MS建立寶藿苷I的體內(nèi)定量分析方法。血漿樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后，以乙腈-水-甲酸為流動相梯度洗脫，單一四級桿質(zhì)譜與電噴霧離子流進行檢測

6、，以二級碎片離子m/z515.76→m/z369.87用于定量分析。該法專屬性強，靈敏度高，血漿用量少，適合于寶藿苷Ⅰ的藥代動力學(xué)研究，為血藥濃度法對比研究淫羊藿炮制前后活性黃酮的藥動學(xué)奠定基礎(chǔ)。
　　(4)對比研究了淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ黃酮成分的藥動學(xué)特征差異，分析藥物濃度(c)-給藥時間(t)的關(guān)系。實驗結(jié)果表明灌胃相同劑量的淫羊藿苷及寶藿苷Ⅰ，用非房室模型計算，藥動學(xué)參數(shù)分別為t1/2(3.05±0.27)h和(22.34±2

7、7.09)h，Tmax(0.75±0.00)h和(0.75±0.00)h，Cmax(450.50±81.50)μg·L-1和(947.25±48.28)μg·L-1，AUC0-t(1510.84±141.88)μg·L-1·h和(2559.12±235.80)μg·L-1·h，AUC0-∞(1650.45±177.71)μg·L-1·h和(9674.15±110.10)μg·L-1·h，MRT0-t(4.09±0.08)h和(5.77±

8、0.14)h，MRT0-∞(5.12±0.34)h和(34.93±36.64)h。其中寶藿苷Ⅰ的生物利用度AUC和最大血藥濃度Cmax明顯提高，平均駐留時間MRT明顯延長。為研究淫羊藿生品和炮制品中活性黃酮成分的藥動學(xué)提供依據(jù)。
　　(5)對比研究淫羊藿生品、加熱品和油炙品黃酮提取物中寶藿苷Ⅰ的藥動學(xué)差異，建立了藥物濃度(c)-給藥時間(t)的關(guān)系。實驗結(jié)果表明灌胃相同劑量的生品、加熱品和油炙品，用非房室模型計算，藥動學(xué)參數(shù)分別為

9、t1/2(3.07±0.36)h、(21.19±39.85)h和(2.14±0.34)h，Tmax1 h、1.5 h和2 h，Cmax(333.75±55.19)μg·L-1、(461.38±69.41)μg·L-1和(533.75±72.99)μg·L-1，AUC0-t(1173.89±104.84)μg·L-1·h、(1882.53±239.34)μg·L-1·h和(2026.89±167.98)μg·L-1·h，AUC0-∞(12

10、66.78±104.691)μg·L-1·h、(1608.02±544.86)μg·L-1·h和(2081.80±154.18)μg·L-1·h，MRT0-t(3.76±0.14)h、(5.30±0.27)h和(3.94±0.08)h，MRT0-∞(4.70±0.27)h、(32.67±56.73)h和(4.24±0.17)h。三者的達峰濃度Cmax、藥時曲線下面積AUC等藥動學(xué)特征參數(shù)均具有統(tǒng)計學(xué)差異，油炙品>加熱品>生品。實驗初步證

11、明了：炮制使淫羊藿產(chǎn)生了更多易于吸收的生物活性黃酮，并且炮制輔料羊脂油提高了活性黃酮的生物利用度，增強了炙淫羊藿的療效。
　　綜上，本文進一步闡述炙淫羊藿的炮制機理為：淫羊藿炮制后，“加熱”使淫羊藿主要活性黃酮的含量發(fā)生變化，淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ含量增加，而淫羊藿苷在體內(nèi)主要代謝為寶藿苷Ⅰ被吸收，并且等量的寶藿苷Ⅰ在體內(nèi)吸收優(yōu)于淫羊藿苷，因此淫羊藿經(jīng)“加熱”炮制后，易于吸收的黃酮成分的增加可轉(zhuǎn)化為血藥濃度的增加進而表現(xiàn)為生物利用度的